乾貨｜縱觀「液體活檢」

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液態活檢作為體外診斷的一個分支，以其非侵入式的血液檢測技術即能監測腫瘤或轉移灶釋放到血液的循環腫瘤細胞(CTC)、循環腫瘤DNA(ctDNA)碎片和外泌體（Exosome），是檢測腫瘤、輔助治療的突破性技術。在早期人們對於液態活檢的重視程度不夠，並沒有發現其潛在的應用價值，所以從循環腫瘤細胞概念提出後的幾十年該領域進展緩慢，但隨著對其研究的深入人們逐漸認識到其巨大的應用價值，在這個階段關於液態活檢的研究呈現出爆炸性增長的趨勢（圖1），而且各大生物公司也對該領域表現出了巨大的興趣，對其開發力度也隨之不斷加大，目前已逐步進入臨床。

圖1 液態活檢研究增長趨勢

液態活檢技術主要包括CTC、ctDNA和Exosome。CTC是由實體瘤或轉移灶釋放的，進入外周血循環的腫瘤細胞，側重於細胞病理診斷，適用於化療效果監測；ctDNA是腫瘤細胞釋放到血液循環系統中的DNA片段，側重腫瘤基因層面，其主要反映的是腫瘤的基因突變信息，更適用於靶向藥物治療；而Exosome來源廣泛，淋巴細胞、樹突狀細胞、肥大細胞及上皮細胞、腫瘤細胞等都可以分泌外泌體，其內含物包含過度表達的特異性的蛋白標誌物，還含有大量的miRNA、cirRNA和DNA片段等，包含的生物信息非常豐富，但目前研究還不夠深入，在臨床上的應用還有待發掘。相比較於傳統的腫瘤診斷手段，液態活檢的優勢在於能解決精準醫療的痛點，通過非侵入性取樣降低活檢危害，而且可以有效延長患者生存期，具有較高的性價比。

自液態活檢問世以來，圍繞其開發出了各種各樣的新技術以促使其能儘早在臨床上應用，尤其是關於CTC富集和分析技術，已先後出現膜過濾法、免疫磁珠陽性/陰性富集法、微流控法、免疫熒光染色、RT-PCR等，這些技術的不斷革新提高了從海量血細胞中獲取CTC的準確度和對後續分析提供了支持，也使該項技術的臨床應用成為可能。但是我們也應看到雖然有各種各樣的新技術湧現，但每一種技術手段都有其局限性，對此，我們進行了歸納總結（如圖2）。

圖2 CTC富集分析技術比較

從總結圖中可以看出現行的CTC分離、分析方法中主要可以劃分為依據抗原抗體特異性識別和細胞物理特性差異兩大類，對於腫瘤細胞特異性抗原的篩選又可分為EpCAM和CK抗原，而物理特性差異又分為密度差異、腫瘤細胞體積差異、變形性差異等。根據上述的分離原理一些生物公司分別推出了自己的產品，匯總如下（圖3），其中尤其以CTC的產品佔據最大比重，這也印證了CTC的產業化相較於ctDNA和Exosome走得更快，引起的關注度更高。目前，液態活檢在歐美地區發展速度很快，他們佔據著該領域的龍頭地位，掌握著最前沿的科技技術，其中強生公司的cell search已經獲得FDA批准上市銷售，isoFlux利用其獨特的陽性富集方法開發出全新、高靈敏性的儀器也有意進入中國內地市場。雖然我國液態活檢起步較晚，與西方存在一定差距，但是也有諸如萊爾生物公司，格諾思博生物公司和廣州益善生物公司開發出了相應的產品，除此之外，國內的一些其他實力廠家看到液態活檢的廣闊前景也在積極布局，投入大量的人力、財力進行研發攻關。相信在不久的將來會有越來越多的液態活檢產品問世。

圖3 液態活檢產品分類

CTC、ctDNA和Exosome作為液態活檢「三駕馬車」， CTC的發展、開發自不必多言，那麼ctDNA和Exosome又處於一個怎樣的階段呢？就目前的發展狀況來看ctDNA和Exosome的研發和產業化尚有很大的空間，無論是機理探究還是研發產品都較少，臨床研究也多集中在一期和二期，而CTC則已經進入臨床階段並且積累了一定的臨床數據（全球範圍內有20個四期臨床試驗），根據調研結果顯示國外目前從事ctDNA和Exosome研究的分別有16家和3家，尚沒有一款產品上市銷售，國內雖然很多公司蜂擁而入但是真正擁有開發出產品實力的公司寥寥可數。CTC、ctDNA和Exosome本同屬於液態活檢領域，它們之間既有聯繫又與區別，這也導致了其研發進度的快慢，我們在此一併對其優缺點進行了總結（圖4），從中可以看到它們互有側重，未來針對其各自特點開發出對應的產品共同為臨床結果的確診形成合力才是它們的發展方向。

圖4 CTC、ctDNA和Exosome的比較

液態活檢應用廣泛，除應用於癌症的預測和治療外，還應用於唐氏綜合症等先天性疾病、性別和親子鑒定、器官排異、以及糖尿病等。但尤以腫瘤領域為重點領域，圍繞腫瘤的篩查、診斷、療效監測等各個方面已經形成完整的覆蓋面（圖5），正逐漸被臨床醫生和病患所接受，我們有理由相信隨著液態活檢技術的進一步成熟，其最終走向市場、服務臨床是必然的，也是攻克腫瘤所必需的。

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