如何面對T細胞急性淋巴細胞白血病的困擾？

T細胞急性淋巴細胞白血病治療手段有限，患者治癒率和生存率均不高，我們不免關注起它的發生髮展。

作者丨袁田

審核丨張翼鷟 天津市腫瘤醫院血液科

尤明建 美國MD Anderson 腫瘤中心

來源丨醫學界腫瘤頻道

這種白血病長期生存率僅約40%

T 細胞急性淋巴細胞白血病（T-ALL）是起源於胸腺細胞的惡性腫瘤，占兒童急性淋巴細胞白血病（ALL）的 15%，占成人 ALL 的 25%。由於對 T-ALL 生物化學、分子生物學、細胞分子通路研究較少，目前對 T-ALL 採用與 B 細胞急性淋巴細胞白血病（B-ALL）相同的化療及幹細胞移植方案。其中化療是目前治療 T-ALL 的主要手段，但其毒性較大，特別對複發的老年患者，治癒率及患者生存率均較低。

近年來，B-ALL 有靶向治療藥物（絡氨酸肌酶抑制）使本來預後較差的 BCR-ABL 陽性患者的預後提高，並且熱門的 CAR-T 免疫治療也給 B-ALL 帶來了希望。但這些靶向治療和細胞免疫治療都不針對 T-ALL，導致 T-ALL 患者長期生存率只有 40% 左右。

投中高質量雜誌，我體會到這些

T-ALL 的研究進展緩慢，引起我們對 T-ALL 疾病發生、發展機制及可行治療策略探索的願望，於是有了這篇關於 MiR-26b 在急性淋巴細胞白血病中的作用機制的文章。此文最終發表於《Leukemia》雜誌（10.March.2017 | doi:10.1038/leu.2017.80. 影響因子12.104 ）。

文章的發表經過幾次大修，經歷了回答審稿人問題、補充實驗等過程，整個投稿過程歷時 7 個月。我們於 2016 年 7 月投稿，2016 年 8 月進行第一次大修，3 個審稿人共提出 30 個問題，大部分問題是圍繞科學思維邏輯性提出的，並且很多問題有重疊，好多問題可通過進一步實驗研究做出回答，有些也是我們實驗過程中遇到的，我們都做了認真回復。2017 年 1 月，文章修回，2 月時第三審稿人再次提出問題，小修之後，3 月被接收。

從開始 miR-26b 研究到文章被《Leukemia》雜誌接受的 2 年多時間裡，作為主要研究者，筆者積累了一些心得體會，藉此與大家分享。

我們發現：

1.二代測序技術已經非常成熟，並且成本不高，大部分研究都可以承受，對二代測序高通量大數據進行深入挖掘是很多科學研究進一步深入的瓶頸，我們的經驗是既要依靠生物信息分析先進的演算法縮小有效數據量，又要研究者細緻深入的查閱文獻，二者缺一不可。

2.要善於應用網路資料庫，避免走彎路。通過篩選的信息可以進一步應用如 Oncomine、GEO、TCGA 等資料庫進行驗證，有助於有效假說的提出，可以節省對生物信息數據驗證的時間及經費。

3.臨床數據對科研方向的指導是十分有重要的，科研必須符合并解釋臨床現象才更有意義和說服力，並且為進一步的轉化醫學研究奠定基礎。

4.研究者的相互交流溝通緊密合作是項目完成的重要保證，特別是研究遇到困難的時候，相互交流可以打開思路，換一個角度解釋問題是解決問題好方法。

5.完成初稿後不要急於求成，多找一些領域的專家及基層科研人員審閱並修改，可以提高投搞的命中率，避免多次拒稿產生強烈挫敗感以至於文章最終「廉價」處理。

6.認真對待審稿人的意見。第一次修稿我們共收到30個問題，逐一分析解答，能補充的實驗盡量完成，審稿人的每個問題都需要充分的重視，因為任何一個小問題都有可能成為拒稿的理由。

以上是我們對文章發表的體會，希望對讀者有一定幫助。對本研究感興趣的讀者可往下看，附有文章的簡要介紹。

研究簡介

1. 模型建立

為探索 T-ALL 疾病發生、發展機制及可行的治療策略，我們建立了 PTEN 基因條件敲除的小鼠 T-ALL 模型，該基因敲除小鼠克服了傳統基因敲除小鼠的缺陷，為T 細胞特異性條件性基因敲除。

在無 Cre 重組酶的干預下，小鼠可以正常生長無臨床癥狀。

Pten 條件敲除小鼠 T-ALL 發病時間為 6-7 周，中位生存時間是 90 天，發病的 T-ALL 小鼠腫瘤浸入多器官系統，包括胸腺、淋巴結、骨髓、肝脾、結腸和骨骼肌。

T-ALL 白血病期小鼠瘤細胞占外周血的 20% 以上。

該模型 T-ALL 細胞表型與人類 T-ALL 相似，共四種免疫表型：CD4、CD8 雙陽、雙陰或單陽。

2. 研究內容

以該模型為基礎通過 RNA-sequence 技術對比小鼠正常胸腺組織和 T-ALL 白血病細胞中 miRNA 表達水平，發現了一系列表達異常的 miRNA。從二代測序結果中篩選有價值的數據是現在大部分研究的重點和難點，因此我們進行了生物信息學分析和生物學水平的雙重驗證。

從大量的數據中發現，miR-26b 在小鼠正常胸腺組織和正常人胚胎胸腺組織高表達，而在小鼠 T-ALL 細胞系和 7 株 T-ALL 白血病細胞系中低表達。隨後我們利用定量 RQ-PCR 檢測 29 例初診的 T-ALL 患者骨髓單個核細胞，發現 miR-26b 在患者白血病細胞中低表達。

這使我們確定了 miR-26b 研究的必要性，並提出假說：miR-26b 在 T-ALL 中起到抑癌作用。

接下來，首先對 miR-26b 進行功能性研究，我們選擇克隆體內 miR-26b 全長，利用慢病毒載體包裝感染 T-ALL 細胞，模擬其體內加工剪切過程，檢測其生物學功能。發現其可抑制細胞增殖促進細胞凋亡。這一步支持了我們的假說：miR-26b 在 T-ALL 中有抑癌作用。

進一步對 miR-26b 進行機制研究，而研究 miRNA 作用機制首先要找到其作用的靶基因，於是我們做了生物信息學預測及測序分析，然後進行文獻檢索。RQ-PCR 及 western blot 驗證發現，miR-26b 對 PIK3CD 的抑制作用，並影響下游信號通路 PI3K / AKT 途徑和 Notch 途徑。

大部分針對 miRNA 研究截至到此已基本完成，而我們希望更深入了解 miR-26b 機制，進一步探索其上游機制。由於 miR-26b 來自我們的 Pten 基因敲除小鼠模型，因此我們利用慢病毒載體過表達 PTEN，發現在 PTEN 缺失的 T-ALL 細胞系中 miR-26b 與 PTEN 表達成正相關，而在 PTEN 野生型 T-ALL 細胞中敲除 PTEN 後 miR-26b 表達隨之降低，但 miR-26b promoter 區並無 PTEN 結合位點，因此我們認為，PTEN 並非是直接調控 miR-26b 的轉錄因子。

通過生物信息學預測，我們找到了一系列 miR-26b 的轉錄因子。其中 Ikaros 過表達後 miR-26b 表達水平明顯增高，進一步 luciferase 實驗和 ChIP 實驗也支持 Ikaros 是 miR-26b 的轉錄因子。文獻檢索發現，PTEN 對 Ikaros 有一定的作用調控關係。因此我們檢測了 PTEN 過表達及敲除後 Ikaros 變化，發現了 Ikaros 異常剪接體隨之變化。以上機制研究說明，PTEN 通過調控 Ikaros 調節 miR-26b 的表達。

從假說提出，到功能和機制驗證，我們共用 2 年時間完成了 miR-26b 的整個研究。

醫院及專家簡介

天津醫科大學腫瘤醫院血液科創建於 2008 年，是集醫療、教學、科研、臨床轉化醫學於一體的三級甲等醫院專業學科；現為國家藥物臨床研究基地、造血幹細胞移植中心、天津醫科大學博士及碩士研究生培養點，參與10餘項國際、國內多中心臨床研究。

血液科收治患者覆蓋所有血液疾病譜，年門診量及出入院病例數居天津市三級甲等醫院前列；在幹細胞移植技術及血液腫瘤的研究方面處於國內領先水平，診療模式與國際先進水平接軌；目前以白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、骨髓增生異常綜合征等血液系統惡性疾病為重點病種，建立並完善各類血液系統腫瘤的分層治療體系，開展血液系統良惡性疾病的造血幹細胞移植，同時與兒童腫瘤科合作，成功開展兒童實體瘤造血幹細胞移植治療，取得較好療效。

張翼鷟，主任醫師、教授、博士研究生導師，現任天津醫科大學腫瘤醫院血液科及移植病房主任。她是中國抗癌協會血液腫瘤專業委員會常委、中國研究型醫院血液精準診療專業委員會常委、中國醫師協會多發性骨髓瘤專業委員會委員、中國抗淋巴瘤聯盟委員、中國女醫師協會血液專業委員會委員及青委會副主任委員、天津醫師協會血液學分會副會長、天津市抗癌協會血液腫瘤專業委員會副主任委員、天津市抗癌協會老年腫瘤專業委員會主任委員。主要從事血液系統惡性腫瘤的化學治療、靶向治療和造血幹細胞移植等綜合治療，擅長各類急慢性白血病、惡性淋巴瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合征（MDS）、各類貧血、血小板減少性紫癜等疾病的診治。

尤明建，1997年畢業於美國德克薩斯州奧斯汀大學獲分子/細胞生物學博士學位。2005至2011年在美國哈佛大學醫學院布里格姆與婦女醫院，任病理學助理教授，2011年9月至今受聘為美國德克薩斯州大學MD Anderson腫瘤中心病理學終身副教授。他主要從事血液腫瘤臨床和病理方面的研究，作為項目負責人，先後承擔包括美國國家癌症研究院/美國國立衛生院（NCI/NIH）等項目在內的科研課題7項，總經費達300萬美元，在《Blood》、《PNAS》等權威雜誌發表多篇文章。

袁田，天津醫科大學附屬腫瘤醫院，血液科，醫師。於2010/07在中南大學湘雅醫學院獲學士及碩士學位，2013/07於中國醫學科學院協和醫科大學血液病醫院血液病研究所獲得內科學博士學位，2014/06-2016/12 在美國MD Anderson腫瘤中心進行博士後研究。參與多項國家級課題研究，包括國家科技重大專項，項目編號：2011ZX09302-007-04，「十一五」國家科技支撐計劃，課題編號：2008BAI61B01。在國內外期刊、會議發表文章10餘篇。

（本文為醫學界腫瘤頻道原創文章，轉載需經授權並標明作者和來源。）

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