潛伏新商機：CRISPR基因編輯系統現「剎車裝置」

2017年，彷彿是CRISPR「本命年」，好事不斷！前有張峰博士連續在nature上發表兩篇論文，現有著名期刊《細胞》雜誌於近日刊登了CRISPR-Cas9基因編輯工具的最新成果：通過X衍射結晶法發現，兩種抑制Cas9活性的蛋白質ACRⅡC1和ACRⅡC3具有完全不同的作用機理，且ACRⅡC1具有廣譜抑制性，即能在不同基因編輯系統中扮演「剎車裝置」的作用，讓基因編輯過程在適當的時候終止，減少脫靶效應。

CRISPR技術發展前景看似一片大好，著實讓大多數已投入CRISPR產品研究的公司振奮。然而技術上的突破，並不意味著我們能把握著商機，因為在實際應用中，我們需要面對是眾多技術向產品轉化上的問題！那麼如何將技術轉化為產品呢？在此，讓我們將目光投向CRISPR技術的眾多生物公司，以廣州往聖生物科技有限公司推出的OneShine long noncoding RNA 過表達細胞文庫為例，讓我們看看如何將技術產品化？

OneShinelong noncoding RNA 過表達細胞文庫：如何將技術產品化？

此系統包括lentiSAMv2質粒和lenti MS2-P65-HSF1_Hygro質粒。lentiSAMv2質粒如圖一所示，其中，eSpcas9(1.1)也叫做dCas9，是將Cas9酶切位點突變後形成的，它只具有結合基因組和sgRNA的能力，而不具備切割DNA的能力。lentiSAMv2質粒是經過改造的gRNA質粒，在sgRNA後面加入了19個鹼基（MS2 binding site）。這19個鹼基經過轉錄後形成一個具有莖環結構的RNA，此RNA能特異性地與MS2蛋白結合。而在另一個載體上，MS2蛋白已經與P65、HSF1蛋白融合。其中，P65、HSF1是兩個轉錄因子。因此，當兩個載體同時進入同一個細胞後，lentiSAMv2質粒表達「sgRNA- MS2 binding site「融合RNA及dCas9蛋白，lenti MS2-P65-HSF1_Hygro載體表達MS2-P65-HSF1。在dCas9作用下，則形成「基因組DNA-dCas9-sgRNA-MS2 binding site-MS2- P65-HSF1」這一超級複合體。當sgRNA為轉錄起始位點時，此超級複合體定位於轉錄起始位點，由於P65、HSF1可以募集更多轉錄因子，因此可啟動轉錄，從而激活轉錄起始位點後面的基因表達。

將合成的9萬多個long noncoding RNA轉錄起始位點的sgRNA（對應1萬多個lncRNA），分別載入lentiSAMv2質粒中，再把此9萬多個質粒混合起來，形成文庫。並且將此文庫整合到了細胞中，一個125c㎡細胞培養瓶中含有約10^8個細胞，每個細胞被激活一個lncRNA，共約1萬個lncRNA被激活，所以含有每個特定基因缺陷的細胞約有10000個（10^8/1萬）。

類似的產品並不少見，像廣州往聖生物公司也不少，行內很多公司將CRISPR技術應用到小鼠上，並取得好的成績。所以，技術層次上我們差別不大，但是區別在於如何尋找一個切入點，將技術與現有產品進行結合，通過CRISPR技術為產品增添附加值，從而將技術產品化！

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