怎樣解決金線蓮種子自然萌發成苗效率低的技術問題？

怎樣解決金線蓮種子自然萌發成苗效率低的技術問題？

金線蓮屬於蘭科開唇蘭屬植物，為地生蘭。金線蓮不僅藥用價值高，在民間素有「藥王」、「金草」等美譽，同時也是一種極具觀賞價值的室內觀賞珍品。金線蓮種子發育不全，沒有胚乳，自然條件下很難獨立萌發成苗，再加上近年自然環境遭受嚴重破壞，鳥、蟲、蛇等為害，人工的過度挖掘，使野生金線蓮瀕臨滅絕。

在這種情況下，金線蓮的人工培養技術顯得尤為重要，而人工培養條件下，種子萌發成苗仍然是整個培養過程的技術瓶頸之一，由於缺乏有效的誘導方法，因此現有技術中金線蓮種子的萌發率較低。儘管有研究者進行了大量嘗試，但目前仍未取得有效的萌發促進方法，嚴重製約了金線蓮培養技術的規模化應用。

1 內生真菌的獲得

將野生金線蓮的根採下，自來水洗凈泥沙，肥皂水浸泡10-20min，沖洗乾淨,75%酒精表面消毒30s,0.1%升汞消毒5min，最後無菌水沖洗5遍。將每條根剪成若干0.5-1.0cm的根段，平放在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA平板培養基，事先滅菌，分裝在無菌的培養皿中)上，每個培養皿接5個根段。對照組為最後一次的清洗液，塗在培養皿中，接種40個培養皿，封口膜封好放於28℃恆溫培養箱中進行暗培養。

待菌長出後，通過劃線的方法進行純化。在超凈工作台上，用接種針輕輕挑起少許菌絲，在PDA平板培養基上劃斜線，隨後用封口膜封好培養皿。觀察菌產生的菌落形態，合併相同形態的菌，將分離出的純菌繼續用PDA平板培養基培養，純菌接種於試管中於-20℃冰箱中保存。

待金線蓮種子成熟時，將真菌從冰箱中取出，用接種針逐一挑出真菌接種在PDA培養基上，放於28℃恆溫培養箱中進行暗培養。培養7-lOd後進行共生培養研究。

2.真菌與種子共生培養

將發酵好的牛糞和木屑基質，加入少量蒸餾水，用手握基質濕潤又捏不出水即可，分裝在若干培養瓶中，高溫高壓滅菌冷卻，備用。

按照常規蘭科種子消毒方法對金線蓮茹果進行消毒，用解剖刀將茹果劃開，將種子抖落在滅好菌的牛糞和木屑基質中。分別在PDA培養基上截取lcmX 1cm真菌小塊，放於播完種的牛糞和木屑基質中，每種真菌在2種基質中各接種3瓶。空白對照只播種不接種真菌。將接完菌和種子的培養瓶放於28℃黑暗條件下培養1周，隨後培養條件為光照時間12h/d,光照強度為2000-25001x，培養溫度26±2 ℃，觀察種子萌發情況。

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