卵巢高鈣血症型小細胞癌免疫活性微環境：免疫檢查點阻斷劑治療原理

導讀

卵巢高鈣血症型小細胞癌（SCCOHT）是由SMARCA4突變驅動的高度侵襲性單基因遺傳腫瘤，主要發生於年輕女性。近年來，SCCOHT生物學研究雖取得了進展，但是其有效的治療手段仍然很少，患者的生存率也很低。然而，免疫檢查點抑製劑PD-1抗體在許多腫瘤中表現出了抗腫瘤活性，那麼，它是否同樣適用於SCCOHT治療呢？本文將系統闡述應用定量免疫熒光和基因表達譜評估SCCOHT PD-1免疫治療的反應，並揭示SCCOHT腫瘤的「免疫景觀」。

高腫瘤突變負荷，腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）以及腫瘤微環境中PD-L1表達可能會促進PD-1/PD-L1抑製劑的反應。MSI等婦科惡性腫瘤研究表明，突變負荷增加與TIL和腫瘤PD-L1表達增加有關。SCCOHT是一種單基因遺傳疾病，因此不存在超突變。截至目前，尚未出現PD-1/PD-L1抑製劑在此類腫瘤中活性的報道，但是最新研究顯示，某些SCCOHT患者獲益於PD-1治療。

研究人員收集了4名年齡介於18~29歲患者的病史，每名患者均具有巨大卵巢腫瘤，並接受腫瘤完全切除術；所有患者在1-3年無病生存期後複發；每名患者均曾接受其他手段治療，然後開始PD-1免疫治療。其中一名患者獲得6個月持續部分緩解，其他三名患者無病生存期持續1.5年以上。本研究所有統計檢測均為雙側檢驗，P值小於0.05被認為具有統計學意義。

儘管無法獲得以上四名患者的生物學樣本，但是既往調查結果促使研究人員研究了腫瘤微環境，以檢驗SCCOHT免疫治療的基本原理。研究人員應用免疫組化（IHC）和免疫熒光（IF）分析，評估了11名SCCOHT患者的腫瘤PD-L1，CD3（T細胞）和CD68（巨噬細胞）表達。結果表明，一名患者除外，其它所有患者均表現出SMARCA4有害突變或缺失（無其他遺傳突變），這說明SCCOHT具有低腫瘤突變負荷。

少量體細胞突變的腫瘤中，大多數腫瘤（10例患者）具有PD-L1表達（範圍=9-287個細胞/HPF）和顯著T細胞浸潤（範圍=3-296個細胞/HPF）。另外，大多數腫瘤（10例患者）也表現出CD68+巨噬細胞浸潤（範圍=10-241個細胞/HPF）。與其他實體瘤相似，研究人員在腫瘤細胞和基質細胞中均檢測到PD-L1表達，並且三名患者的腫瘤相關巨噬細胞為豐富的PD-L1陽性細胞。

所有患者（低PD-L1陽性患者除外）T細胞浸潤和PD-L1表達之間強相關（R2=0.46, P=0.02；皮爾遜積差相關係數）。8名患者PD-L1表達與T細胞浸潤顯著相關（R2= 0.60–0.95, P

PD-L1表達與T細胞浸潤之間的關係表明，PD-L1表達可能並非固有的，而是一種對抗TIL的適應性免疫機制，作為對腫瘤微環境中IFNγ產生的回應，PD-L1表達可能上調。患者巨噬細胞和癌細胞中PD-L1表達差異可能暗指細胞間固有的生物學差異或T細胞產生IFNγ的不同反應。

為更詳細地表徵腫瘤炎症反應及其與PD-L1表達的相關性，研究人員應用Nanostring nCounter PanCancer免疫分析面板進行了基因表達譜分析。高PD-L1組中，大多數差異性表達基因（34/36，P＜0.05）升高，並且與T細胞特異性或細胞毒性相關；PDCD1表達較高（差異倍數=0.3；95%CI=1.4-3.8，P=0.03），CD274表達也較高，但是後者不具統計學意義，這可能是由於PD-L1陽性細胞的異質性或PD-L1表達轉錄後調控。

基因表達細胞類型反褶積表明，高PD-L1組更常見所有類型的免疫細胞，這就進一步證實了PD-L1陽性與免疫應答增強之間的相關性。最高評分細胞類型中，所有細胞均具有抗腫瘤活性，如T細胞，Th1，CD8，和細胞毒性細胞。高PD-L1組中，編碼CD3，CD3E的兩個基因均升高，這說明TIL和PD-L1陽性細胞共存於SCCOHT。研究人員也觀察到高PD-L1組中細胞溶解和抗原呈遞基因升高。

在統計學上，細胞毒性基因中，穿孔素1（PRF1，倍數變化=3.2, 95％CI=2.4-4.5，P

KEGG通路分析表明，T細胞受體信號傳導通路活性增加，這與研究人員所觀察到的「SCCOHT中，TIL參與主動免疫反應」這一結果相符。值得注意的是，高PD-L1病例中，兩例的PD-L1主要表達於巨噬細胞，其他兩例表達於腫瘤細胞。同樣，低PD-L1組中，PD-L1表達主要見於巨噬細胞和腫瘤細胞。高PD-L1或低PD-L1組的亞組之間無明顯T細胞相關基因表達差異。

以上數據表明，SCCOHT是免疫原性腫瘤，並且在生物學上，T細胞浸潤和PD-L1表達水平顯著。SMARCA4是染色質重塑SWI/SNF複合體成員之一，參與多種生物學過程，如轉錄調控。由SMARCA4調控的轉錄程序可能影響腫瘤免疫原性，引起TIL浸潤和PD-L1上調。由於SCCOHT是一種單基因遺傳疾病，所以這種免疫原性可能源於SMARCA4功能喪失。然而，SCCOHT是一種罕見的疾病，因此研究的主要局限性是樣本量少。另一局限性是未獲得曾接受抗PD-1免疫治療患者的組織。

這些數據描述了SCCOHT腫瘤的免疫景觀和腫瘤微環境，它類似於其它對抗PD-1免疫治療反應良好的免疫原性腫瘤，這就為SCCOHT患者應用抗PD-1免疫治療提供了強有力的依據。這些發現強調了突變負荷與免疫原性之間的不一致性，強調了其它生物標誌物用於免疫系統識別腫瘤的必要性。

文章編譯自：Petar Jelinic，Jacob Ricca， Elke Van Oudenhove，Narciso Olvera，Taha Merghoub，Douglas A Levine，Dmitriy Zamarin. Immune-Active Microenvironment in Small Cell Carcinoma of the Ovary, Hypercalcemic Type: Rationale for Immune Checkpoint Blockade. JNCI. 22 January 2018.

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