杜絕傳染病蔓延 始於早期診斷——寨卡病毒快速診斷新技術

紐約大學牙科學院協同美國Rheonix公司開發了一種利用唾液準確鑒定寨卡病毒感染的新方法，不僅操作方便而且耗時短，極具商業推廣價值。這項測試由Rheonix公司的HIV快速檢測模型發展而來，成果現已發表在《PLOS ONE》和《Journal of Visualized Experiments》兩本雜誌。

寨卡病毒肆虐全球，如何測試是否感染了寨卡？

寨卡隨起源於巴西，但是由於人口集中和航空旅行等因素這種傳染病的發病頻率日益高升，世界衛生組織宣布寨卡引起的出生缺陷問題已經上升至全球公共衛生危機。

「寨卡事件使我們意識到，為了減少未來新興傳染病的國際影響我們必須建立有效的監測和診斷程序，」這兩篇文章的主要作者、紐約大學牙科學院基礎科學和顱面生物學系博後研究員Maite Sabalza博士說。

病原體的早期識別是杜絕傳染病蔓延的關鍵。檢測過程通常分為兩個獨立步驟：1、檢測病原體的核酸（RNA或DNA）；2、檢測抗體，即人體對抗病原體而製造的蛋白質。

血液是最常用的、依託於RT-PCR（實時聚合酶鏈反應）技術的寨卡病毒診斷樣本。但是人們感染寨卡病毒後一到兩周病毒就會在血液中「消失」，反而在唾液、精液和尿液中的存留時間更長。另外，建議聯合採用抗體檢測的原因在於，感染病毒後產生的抗體蛋白在體液中的持續時間可達數月至數年。

因此，美國國立衛生研究院資助紐約大學的研究人員開發了這款結合核酸和抗體檢測於一體，可通過唾液樣本快速檢測寨卡病毒的新方法（Chemistry and Reagent Device，Rheonix CARD）。一方面寨卡病毒在唾液中的持續時間大於血液，另一方面唾液採集是非侵入性的，成本效益高，採集過程相對尿液或血液快速簡便。

最重要的是，現行的RT-PCR檢測需要3個小時左右才能出結果，而特異性抗體檢測可能需要幾個星期，新測試方法從採樣到產生結果用時短至僅需幾分鐘！

研究人員另外還採用了其他方法，如耗時20分鐘的等溫擴增核酸檢測，以及利用寨卡特異性抗原進行抗體檢測等方法。

「越早識別病原體，就能越早採取措施治療和隔離感染人群，在流行病期間，我們的方法允許機場安檢人員在登機前對旅客進行測試，」基礎科學教授Daniel Malamud博士說。

從HIV到寨卡

「當初我們開發HIV核酸序列和特定抗體抗原識別檢測時就考慮到以後可以用同樣的模式診斷其他傳染病，」Malamud說。

在《PLOS ONE》文中，研究人員描述了針對寨卡病毒的核酸檢測序列，以便使用攜帶型恆溫擴增裝置對寨卡的RNA進行重點護理即時檢驗。在確認了純化的寨卡RNA和寨卡感染者唾液的檢測結果之後，研究人員使用Rheonix CARD試劑盒和工作站對唾液樣本中的病毒含量進行評估（病毒數量與疾病的嚴重程度和免疫反應息息相關，特別是對孕婦和胎兒）。

在《Journal of Visualized Experiments》文中，研究人員使用高密度肽晶元鑒定出了寨卡病毒的特異性抗原。由於寨卡易與登革熱、切昆貢亞熱等病毒混淆，識別寨卡特異性抗原可以提供更精確的診斷。

證據顯示，Rheonix CARD試劑盒可同時自動進行病毒核酸和抗體兩種檢測。研究人員正在世界各地採集唾液繼續進行驗證工作。

「制定迅速有效的診斷方法和通用標準是我們的努力目標。只要該程序可行，我們就能適應未來新出現或重新出現的任何傳染性疾病，」Sabalza說。「除了能非常迅速地確診傳染病病原體，我們的全自動測試平台幾乎無需人為動手，對沒接受過培訓的人來說也很好操作。」

原文檢索：

Detection of Zika virus using reverse-transcription LAMP coupled with reverse dot blot analysis in saliva. PLoS One. 2018 Feb 5;13(2):e0192398.

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery. J Vis Exp. 2017 Dec 12;(130).

編輯：胚芽鞘

來源：生物通

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