牛磺酸鵝去氧膽酸對小鼠體內氧自由基代謝的影響

[摘　要]　研究了牛磺酸鵝去氧膽酸(TCDCA)對小鼠體內氧自由基代謝的影響。分別採用黃嘌呤氧化酶化學發光法、化學比色法、紫外分光光度法、硫代巴比妥酸法及酶標法測定了小鼠血漿、肝臟、腦組織中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)的含量及血漿中一氧化氮合成酶(NOS)的活性。結果顯示,高、低劑量的TCDCA均能顯著提高小鼠血漿和肝組織中的SOD活性,顯著提高小鼠肝組織中CAT的活性,顯著提高小鼠血漿中NOS活性,顯著降低小鼠肝組織中GSH-Px活性;高劑量TCDCA能極顯著提高小鼠腦組織中GSH-Px活性;低劑量TCDCA能顯著提高小鼠血漿中CAT活性;高、低劑量的TCD-CA能分別顯著降低小鼠血漿和腦組織、肝臟中的MDA含量。試驗表明TCDCA具有顯著的抗氧化作用。

[關鍵詞]　牛磺酸鵝去氧膽酸;氧自由基;代謝

氧自由基主要包括超氧陰離子(O-2)、羥自由基(OH )、過氧化氫(H2O2)、烷氧自由基(RO )等,可對機體內生物大分子如蛋白質、核酸、碳水化合物等造成損傷而呈毒性作用[1,2]。牛磺酸鵝去氧膽酸(TCDCA)是動物膽汁中具有較高生物活性的有效成分之一,具有降低膽汁成石性的作用,能夠抑制金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌,對急慢性炎症均有很強的抑制作用,且能夠完全對抗大腸桿菌內毒素及蛋白腖等所致的大鼠發熱反應,呈現很強的解熱作用[3～5]。目前尚未見關於TCDCA對動物體內氧自由基代謝影響的報道。為此,筆者開展了TCDCA對小鼠及未給葯對照組小鼠體內氧自由基影響的研究,旨在探討TCDCA對小鼠體內超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶和丙二醛、一氧化氮合成酶活性及含量的影響,並試圖闡明TCDCA的抗氧化機理,進一步發現TCDCA的藥用價值,為動物膽汁中有效成分的開發利用提供理論依據。

1材料與方法

1.1動物

清潔級純昆明種小白鼠,雌雄各半,體重(20±2)g,由內蒙古大學實驗動物中心提供。

1.2 藥物與試劑

TCDCA,純度97. 8%,由本課題組從雞膽汁中提取;SOD活性試劑盒、GSH-Px活性試劑盒、CAT活性試劑盒、MDA含量試劑盒,均由南京建成生物工程研究所提供;NOS試劑盒,由北京天來生物醫學科技有限公司提供;肝素納,批號0402112,江蘇萬邦生化醫藥股份有限公司生產;冰乙酸,批號880306,北京化學試劑一廠產品。

1.3儀器

雙光束紫外/可見分光光度計, TU-1901型,北京普析通用儀器有限責任公司;型號SCR20BC,低溫高速離心機,日本東京HITACHIKOKICO. LTD.;可調恆溫水浴鍋,北京醫療設備廠;超聲波細胞粉碎機,型號JY88-II,寧波新芝科器研究所;酶標儀,A-5028型,奧地利。

1.4動物分組及給葯

取小鼠36隻,隨機分成3組,每組12隻。第1組為陰性對照組,蒸餾水灌胃10 mL /kg;第2組為TCDCA低劑量組,灌胃給葯0. 1 g /kg;第3組為TCDCA高劑量組,灌胃給葯0. 2 g /kg。每日1次,連續給葯7 d。

1.5　樣本採集及處理

於末次給葯後1 h,經小鼠眼框下靜脈採集血樣,用事先準備好的肝素鈉(250U /mL)抗凝,3 000 r/min離心10 min,分離血漿,4℃冷藏保存備用。采血後立即處死小鼠,剖取肝臟和腦組織,稱其濕重,按1∶9加入預先冷凍的生理鹽水,用超聲波粉碎機在同一條件下粉碎(Oscilla-tion 20 s,Break 10 s,Timer2 min),勻漿液以3 000r/min離心10 min,分離上清液,用於SOD、GSH-Px、CAT、MDA和NOS的測定。

1.6　檢測指標與方法

SOD採用黃嘌呤氧化酶化學發光法,GSH-Px採用化學比色法,CAT採用紫外分光光度法,MDA採用硫代巴比妥酸法,NOS採用酶標法,檢測步驟均按試劑盒說明書要求進行。

1.7　統計學方法

實驗結果均以x±s表示。採用SPSS11. 0軟體進行數據處理,兩個樣本均數比較採用t檢驗,P

2　結果

2. 1　TCDCA對小鼠體內SOD活性的影響

結果見表1和圖1。與對照組相比,高劑量和低劑量TCDCA組均能極顯著提高小鼠血漿和肝組織中的SOD活性;腦組織中的SOD活性與對照組比較未見顯著性差異。

2. 2　TCDCA對小鼠體內GSH-Px活性的影響

結果見表2和圖2。與對照組相比,高劑量和低劑量TCDCA組均能極顯著增高小鼠血漿中的GSH-Px活性,極顯著降低肝組織中的GSH-Px活性;高劑量TCDCA組能極顯著增高小鼠腦組織中的GSH-Px活性。

2. 3　TCDCA對小鼠體內CAT活性的影響

結果見表3和圖3。與對照組相比,低劑量組TCDCA能顯著增強小鼠血漿中的CAT活性;高劑量和低劑量組TCDCA均能極顯著增強小鼠肝組織中的CAT活性;腦組織中的CAT活性與對照組比較未見顯著性差異。

2. 4　TCDCA對小鼠體內MDA含量的影響

結果見表4與圖4。與對照組相比,低劑量TCDCA能顯著降低小鼠肝組織中的MDA含量;高劑量TCDCA能顯著降低小鼠血漿和腦組織中的MDA含量。

2. 5　TCDCA對小鼠血漿中NOS的影響

結果見表5與圖5。與對照組相比,高劑量和低劑量組TCDCA均能顯著增高小鼠血漿中的NOS活性。

3　小結與討論

3. 1　SOD可清除超氧陰離子(HO-2或O-2)自由基,保護細胞免受損傷,對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關重要的作用[6]。CAT在動物體內主要存在於紅細胞與肝臟中,腦組織中幾乎沒有CAT的分布[7]。CAT的主要作用是清除過氧化氫,防止其與O-2在鐵螯合物作用下生成非常有害的羥基自由基( OH)。GSH-Px是機體內廣泛存在的一種重要的氧化氫分解酶[8],可特異地催化還原型谷胱甘肽(GSH)對過氧化氫的還原反應,有保護細胞膜結構和功能完整的作用。GSH-Px與CAT具有良好的協同抗氧化作用,在CAT含量極少的腦組織中,主要靠GSH-Px來清除H2O2[9]。MDA可引發脂質過氧化作用,不僅可轉化活性氧,還可通過鏈式反應放大活性氧的作用[10]。NO是一種重要的生物信使分子,作用極其廣泛,NO可影響脂質代謝,抑制脂質過氧化[2]。NOS作為NO合成的關鍵酶,其活性變化直接調節NO的生成量及其生物學效應[11]。

3. 2　SOD、GSH-Px、CAT在動物體內的合成受到超氧陰離子及過氧化氫的影響,當酶的活力能夠滿足機體需要時,酶水平便不再增加[12]。這3種酶與體內的金屬元素Fe、Cu、Zn、Se的水平有直接關係,這些元素的水平可直接影響這3種酶的活性。此外,酶活性還與動物年齡,以及一些應激因素有關,酶與酶之間具有協同、互補、代償和保護等作用,內在聯繫非常複雜,受體內許多因素的影響。

3. 3　本實驗的結果顯示,小鼠灌服TCDCA後,血漿中SOD、GSH-Px、CAT及NOS活性均顯著增高;肝組織中SOD和CAT活性均顯著增高;腦組織中GSH-Px活性顯著增高;血漿、肝組織和腦組織中MDA含量均顯著降低。結果提示,TCDCA可通過提高各抗氧化酶的活性及平衡各抗氧化酶在動物不同組織中的分布與活性,增強機體抗氧化能力,抑制脂質過氧化,降低機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度,抵抗氧自由基對動物機體的損害,延緩機體衰老。

參考文獻

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文章來源：文章來源：楊鍾，李培鋒的《牛磺酸鵝去氧膽酸對小鼠體內氧自由基代謝的影響》

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