血液系統腫瘤診斷方法簡述

血液系統腫瘤的臨床表現相似，如貧血、出血、感染、浸潤等，實驗室檢查為重要的鑒別依據，包括形態學（Morphology)、免疫學（Immunology）、細胞遺傳學（Cytogenetics）和分子生物學（Molecular）四個方面，即MICM整合診斷，根據MICM的檢測結果，基本能準確診斷大部分血液系統疾病，並且能夠指導治療和評估預後。

形態學檢查常見有外周血塗片、骨髓塗片、骨髓或淋巴組織切片。若外周血中存在原始細胞，可通過外周血塗片和全血細胞計數，初步判斷疾病的類型：髓系、淋系等，然後根據骨髓塗片中原始細胞的形態、比例進一步確定疾病的亞型（髓系M0—M7，淋系L1-3或MDS等），即傳統的FAB形態學檢查。臨床中仍存在多次穿刺失敗、稀釋等現象，骨髓活檢可彌補不足，骨髓活檢對骨髓的纖維化、造血組織多少、骨髓增生度、腫瘤骨髓侵犯、局灶性病變等具有優勢。血液形態學檢查是血液系統疾病診斷的基礎，但對疾病診斷率僅為60%左右，與精確診斷分型、甚至精準治療的要求甚遠。

免疫分型檢查是形態檢查的重要補充和深化，在造血幹細胞分化增殖為成熟細胞過程中，細胞表面及胞漿內的抗原是隨分化不斷發生改變，當細胞的任何分化增殖階段發生突變，該階段分化抗原改變則提示腫瘤細胞發生的階段。這些分布於血細胞表面或胞漿的抗原，統稱分化抗原，這些抗原通過雜交瘤技術製備各自的抗體稱為單克隆抗體，單克隆抗體和其識別的抗原，統一用CD表示。

免疫分型的實驗室檢查設備為流式細胞儀，流式細胞術（FCM）是流式細胞儀結合現代多學科、高度發展、相互交叉而形成的一門高新技術，根據FSC/SSC對細胞大小、形態及內部細胞器的分析，具有快速、準確、定量、定性特點，可測定含有某種目的抗原的細胞、細胞上的特定抗原。目前常用公認的系列特異性分化抗原是：髓系：MPO 、CD33 、CD13-15；巨核系：CD41-42、CD61；B系淋巴細胞：CD19、CD20、CD22、CD79a；T系淋巴細胞：CD2-5、CD7-8；漿細胞：CD38、CD138。

多數血液淋巴腫瘤患者有非隨機的染色體數目改變或結構的畸變，甚至有的染色體畸變早於臨床表現多年。染色體核型異常提示腫瘤的本質，染色體克隆性改變常作為疾病獨立的預後指標，有學者稱之為「命中注定」、「預測神器」，診斷時的核型特徵決定患者獲得緩解程度、緩解持續時間等，細胞遺傳學的改變對血液腫瘤的診斷、分型、治療方案選擇、預後評價及發病機制等有重要的價值。

染色體檢測方法有常規核型分析法和熒光原位雜交技術（FISH）。常規核型分析常用的顯帶技術為R和G帶，R帶顯示與G帶相反，對染色體末端缺失和易位優於G帶，但對微小異常的發現較差，而G帶對染色體中間部分的變異較敏感。核型分析時兩者同時聯選，起互補作用。FISH 起於上世紀80年代，號稱生物科學中的「釣魚」技術，通過熒游標記的DNA探針與細胞核內的DNA靶序列雜交，易識別整條染色體、染色體1個臂、1條帶、甚至1個基因對，對染色體識別的精確性、敏感性極高。人類細胞遺傳學國際命名體制規定，至少2個細胞有同樣的染色體增加或結構重排，或至少3個細胞有同樣的染色體缺失，方可定為存在1個異常克隆。這就要求染色體核型分析至少20個中期分裂相細胞，當分析的細胞數不足又未能發現異常時，不能得出正常核型的結論,可能因為腫瘤細胞分裂指數低下或相關的亞顯微水平的改變難以檢出，染色體檢查標本採用骨髓液為佳，對部分病人如外周血發現原始或幼稚細胞≥10%，亦可採用外周血進行核型分析，對淋巴瘤採用淋巴結穿刺液或活檢標本製備。

血液淋巴腫瘤是多基因變異性疾病，這些基因在癌變過程中起關鍵的節點作用，統稱為腫瘤相關基因。一種或多種基因與某特定腫瘤類型相對應，成為腫瘤分子生物學的標誌，主要有基因突變、融合基因、癌基因、抑癌基因等。腫瘤相關基因的檢測在血液淋巴腫瘤的病機、診斷分型、療效評估、預後判斷、治療方案選擇、病情追蹤和新治療方向發現等均有重大幫助。

目前對腫瘤相關基因的檢測常用方法有：聚合酶鏈反應（PCR）、FISH、印跡技術等，及近幾年出現的生物晶元和DNA測序等。目前血液病常用檢測基因約60餘種，從理論上推斷，分子生物學與細胞遺傳學改變是一致的，如BCR-ABL陽性與Ph染色體陽性，但分子生物學的異常並不一定引起細胞遺傳學的異常，如BCR-ABL陽性而Ph染色體陰性。許多情況下分子生物學異常並不伴有顯性細胞遺傳學異常，這與目前染色體檢測技術有關，因此在微小殘留病變檢測中，分子生物學檢測如融合基因比率降低更能比細胞遺傳學反映緩解程度。

總之，血液病的診斷依賴於實驗方法的創新，形態學始終基礎，整合免疫學、遺傳學、分子生物學檢測的綜合診斷模式，是當今血液系統腫瘤的規範化診斷方法，為精準醫療提供了依據。

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