CAR-T之後，慢病毒載體臨床治療再獲成功

慢病毒載體（Lentivirus）作為一個常規的病毒實驗載體已經熟用於我們的日常實驗中，但是其是否可以安全的用於臨床治療一直飽受爭議。繼CAR-T細胞治療後，近日，又一轟動性的研究成果展示了慢病毒載體的無限可能。

2018年4月19日出版的《新英格蘭醫學雜誌》（NEJM，影響因子:72）發表論著《輸血依賴型β-地中海貧血患者的基因治療》（Gene Therapy in Patients with Transfusion-Dependent β-Thalassemia）。研究者，利用了慢病毒介導的基因治療方案——LentiGlobinBB305對β地中海貧血患者進行了治療，並獲得了顯著療效，同時顯示，慢病毒載體的基因療法是安全的。該新型基因療法可使輸血依賴型β地中海貧血（TDT）患者免於或減少長期輸血。

治療流程

在美國對病人給葯filgrastim 和 plerixafor處理，收集病人造血幹細胞與原代細胞；

富集CD34+細胞，並對細胞進行BB305慢病毒載體轉導處理，得到的藥物產品命名為LentiGlobin，低溫儲藏；

對病人進行連續4天的白消安（ busulfan ）骨髓抑制處理，（注射劑量依據病人血清白消安葯代動力學分析結果來調整）；

72小時監察，確定病人達到醫學認定的穩定期（連續3天病人每立方毫米血樣中有至少500個中性粒細胞）；

在HGB-204臨床實驗中，β0/β0基因型病人注射劑量中位值為11.0（6.1-18.1）百萬CD34+細胞，其他基因型注射7.2（5.2-13.0）百萬CD34+細胞；

在HGB-205臨床實驗中，1位IVS1-110突變基因型病人注射8.8百萬CD34+細胞，其餘3位βE/β0基因型病人注射劑量中位值為12.0（8.9-13.6）百萬CD34+細胞（注射量見下表）；

綜合分析各項檢測指標並進行安全性評價。

造血功能恢復

經過lentiGlobin藥物靜脈注射治療後，植入性中性粒細胞和血小板在中位值17天及30天出現，期間未有流血併發症出現。載體在PBMCs中的平均拷貝數如下圖所示，在HGB-204的每二倍體基因組中的拷貝數為0.3，在HGB-205的拷貝數為2.0。且在PBMCs中的拷貝數與載體在藥物中的拷貝數成正相關。病人血液中HBAT87Q蛋白水平提高，對紅細胞注射依賴量的減少73%。

在22位病人中，13位為非β0/β0基因型，除一人外（其注射藥物中載體拷貝數為0.3，注射後體內為0.1，拷貝數太少）其餘均停止了紅細胞注射治療，HbAT87Q含量中位值是6.0g每分升，血紅蛋白含量為11.2。9位β0/β0基因型病人，與兩年前未接受治療相比，對紅細胞注射的需求量減少73%。在兩項研究中，血液中HbAT87Q表達水平與血液中載體拷貝數相關，與年齡、基因型、脾切除狀態無關。

溶血和紅系造血異常影響

總體上病人血紅蛋白趨於穩定，溶血現象趨於緩解。紅系造血異常現象在3位βE/β0基因型中被消除，在IVS1-110基因突變型病人中無效造血現象的生物標記物也未被發現。

安全性評價

BB305載體去除了cHS4絕緣體核心來增載入體的穩定性和滴度，且整合了巨細胞病毒啟動子來驅動載體在包裝細胞中轉錄。在兩項研究中，高滴度、大規模、臨床應用級別的BB305慢病毒載體使用離子交換色譜法進行生產和純化。BB305慢病毒載體的在兩個研究中，病人並未出現安全問題，複製能力的慢病毒也未被檢測到，血液樣本檢測載體為多克隆整合位點（202-8685），並未發現dominant clones。在本次研究之前的LG001號臨床研究中的1003號病人曾出現過在HNGA2位點的優勢克隆，但隨後的研究表明病人此為點的優勢後續自主消除，期間未因此發生副作用。

研究表明，LentiGlobin藥物（慢病毒載體）可成功代替β地中海貧血症患者的傳統治療（等待捐獻者匹配骨髓），通過基因改造的手段進行治療，其安全性得到了全面的臨床驗證，患者響應率為100%，而這項研究目前仍在跟進，擬定後續跟進13年。這將是人類疾病治療史上的里程碑事件，基因治療技術經過長期理論實踐，已然結出了造福全人類的果實。

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