細胞凍存和復甦-過上「長命百歲」的生活

最新 05-08

近年來的科幻電影，尤其是涉及到外太空探索、外星種族大戰之類的，男女豬腳常常從太空飛船的休眠倉內醒來，繼續進行戰鬥，比如深空失憶。

似乎在外太空睡個十年百年的仍然容顏不老，男（女）友力MAX。而在細胞的世界，真正實現了休眠（凍存）和蘇醒（復甦），並且anytime喲（好啦，表羨慕人家啦哈哈哈）

細胞凍存

為何要讓細胞碎覺呢？不是可以傳代的嗎?又不是青蛙要冬眠。

經常跟細胞打交道的人都知道，細胞傳代次數過多，遲早會出現變異現象，或者簡單點說，細胞太老了，有些器官和功能就沒有那麼好用了，需要更新換代啦；還有可能我在A地，我啃文獻後發現我需要的細胞是另外B地的一個實驗室裡面才能有，必須要從B運輸到A；再或者，我是實驗小白，技術不佳，可能養著養著細胞也就不愛我了，掛了，那我就需要新的細胞來補充我空虛的心靈……諸如此類原因，就需要我們將手頭的細胞進行低溫保存（-70~-196℃也就是休眠啦）。

凍存的方式有好幾種，可以程序性凍存，也可以通過購買凍存盒來快速凍存到-70℃：

程序性凍存：4℃儲存半小時，-20℃儲存2小時，隨後置於-80℃冰箱過夜，依照我自己的經驗，如果是經常需要使用的細胞株，我會儲存在-80℃使用即可；如果非常重要的細胞株，會在液氮中及-80℃中均保存。

凍存盒（使用前需要先從-70℃冰箱拿出置室溫平衡10分鐘以上）就簡單很多啦，把凍存管直接置於凍存盒中，隨後置於-70℃冰箱即可。

對於我而言，細胞的凍存液無非也就採用兩種，一種是包含10%二甲亞碸（DMSO），10%血清的新鮮培養基；一種是包含10%DMSO的全血清去凍存（介個比較費血清，也就是錢！大家按需操作，據說很多國外實驗室都是這麼乾的，有錢淫沒辦法）。

這個過程比較簡單，方法也不局限於這些，小筆只是分享我自己常用的方法，比較需要注意的就是，在凍存細胞之前需要確保細胞的活力，也就是精神頭是否旺盛，就像小青蛙，從秋天開始就在逐漸儲存脂肪，冬眠時，啥也不吃也能安然度過；此外，需凍存的細胞在加入凍存液後也要迅速的放入低溫冰箱中，以免常溫下DMSO對細胞有所損傷。

細胞復甦

春回大地萬物復甦，小青蛙也要蘇醒過來啦。對於我們細胞而言，當我們實驗需要時，便要將低溫凍存的細胞復甦出來使用。

有語:慢凍速溶。所以復甦細胞最重要的就是一個快字。凍存後的細胞比較脆弱，身體機能還沒有完全恢復到最好的狀態，要動作輕緩。

將細胞自-80℃或者液氮中取出，將凍存管置於37℃水浴鍋中快速融化，隨後離心去除DMSO，加入完全培養基培養即可，保證細胞長的漂漂亮亮的。

也有人說可以先不去除DMSO，直接鋪板加入凍存液10倍的完全培養基培養，培養24小時後再更換，小筆這種方法沒有嘗試過，大家自行決定哈，如果細胞長不好不要來打我，嘻嘻。