你做小鼠的基因型鑒定嗎？需要多久？
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你能在四個小時內完成剪小鼠尾巴、PCR、得到基因型結果嗎？
這裡介紹一個快速方法。
剪取小鼠尾巴
1. 用剪刀剪取小鼠尾尖約2毫米，用鑷子夾入EP管中或直接剪入EP管中；
2. 用紗布（或消毒紙巾）按壓小鼠尾部斷端止血；
3. 在繼續剪下一隻之前，應該用酒精擦凈手術剪及鑷子。
註：已剪下的鼠尾，如不即時鑒定，應存於-20℃冰箱中。
鼠尾消化
1. 每管中加入100-200微升NaOH溶液 (裂解液：50 mM NaOH+1 mM EDTA[也可不加])。現用現配，比如：1 N NaOH 以20倍稀釋。)
2. 加熱至95oC(90-100℃都可以)，持續60分鐘(每20分鐘時彈動一下EP管，使尾尖懸浮)；
3. 每管加入10-20微升Tris溶液 (中和液：1 M Tris-HCl, pH7.5)，渦旋混勻；
高速離心30秒。
註：如不及時鑒定，應存於-20℃。
PCR(僅供參考，可依照商品說明書)：
水 8μl
2x PCR Mix 10 μl
可用商品化的，一般公司都用出售。
引物混合液 1 μl （上下游引物各10 pM/μl）
小鼠DNA樣品(上清液) 1 μl
總量 20 μl
註：須包含對照 - Wt, He，Ko 等。
PCR程序：(僅供參考，可依照商品說明書，以及引物和產物性質等做調整)
94℃ 3 分鐘
94℃ 20 秒
60℃ 30 秒
72℃ 30 秒
35 循環
72℃ 3 分鐘
註：如不及時鑒定，應存於4℃冷藏室，不要-20℃冷凍。
7. 電泳：
1. 瓊脂糖凝膠的濃度一般用1.5%的。電泳液一般用1x TAE液。
2. 電壓120伏，20-40 分鐘。
8. UV下觀察、拍照，判斷基因型結果。
50x TAE (1L) 緩衝液配置：
2 M Tris-醋酸,100 mM EDTA。
1. 稱取 Tris-base 242 g
Na2EDTA·2H2O 37.2 g
加入約800 ml的去離子水，充分溶解。
2. 加入57.1 ml的醋酸，充分混勻。
3. 用去離子水定容到1L。室溫保存即可。
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