AACR 2018 CAR-T細胞治療最全摘要
2018年AACR會議已經過去，這裡總結了AACR會議上CAR-T治療相關所有摘要，對於了解目前CAR-T治療領域的研究進展以供參考。在整理的摘要中，除了出現較多的CAR-T聯合免疫檢查點抑製劑的研究、TCR-T和基因編輯技術產生的通用型CAR-T研究外，還出現了關於化療藥物對CAR-T療效的影響，iPS誘導的T細胞來源的CAR-T研究、設計有調控開關的CAR-T和巨噬細胞toll樣受體CAR，研究者的關注點主要集中在CAR-T治療的安全性和實體瘤治療的有效性上，可見目前常見的CAR結構已不能滿足腫瘤治療的臨床需求，尤其是CAR-T治療在實體瘤中的應用已經遭遇技術屏障，需要進行新的CAR結構設計或治療方案研究。
以下為此次會議上與CAR-T治療相關的會議摘要翻譯：
1.替莫唑胺抗性的CAR-T治療同步放化療可以加強實驗動物體內膠質瘤細胞的清除
傳統
同時接受放療和化療的膠質母細胞瘤（GBM）患者Temozolomide（TMZ）化療劑的使用會降低T細胞免疫療法的效果，因為TMZ能夠誘導嚴重的細胞毒性。報告者通過在現有的IL13CAR主幹中引入了一種突變的o6-甲基-甲基轉移酶（MGMT），從而製造了一種針對il13r2+GBM腫瘤的tmz-耐藥性CART細胞。MGMT（P140KMGMT）的這種特殊突變阻礙了TMZ與MGMT的互動，從而從TMZ誘導的淋巴細胞毒性中保護了快速擴散的抗GBM CAR-T細胞。
2.抗MUC1*CART治療實體瘤
Minerva Biotechnologies
認為截短的MUC1具有生長因子受體功能而非全長的MUC1，傳統的靶向全長的MUC1療法只會對促進腫瘤的MUC1*形式進行濃縮。報告者設計了anti-MUC1* CAR T, huMNC2-CAR44，已經完成人體組織IND研究（n>3000）。huMNC2-CAR44在90%以上的乳房、83%的卵巢、78%的胰腺和71%的肺腫瘤中都有明顯的染色，但在大多數正常組織中沒有染色，包括關鍵器官，huMNC2-CAR44是安全和有效的。體內humnc2-car44 T細胞在抑制腫瘤生長方面非常有效。Kaplan-Meier曲線顯示，在第61天，在CART組中，HCT-MUC1小鼠沒有與腫瘤相關的死亡，而非轉導T細胞和PBS組動物在第20天全部死亡。在第18天，對CART治療組的平均測量值為0.5*10^7，而非轉導T細胞治療組的平均值為8.7*10^8。
3.利用雙特異性小分子適應器和單特異性競爭者實現實時調控的調節性CART
Purdue University
利用腫瘤特異性配體相關聯的FITC半抗原實現對CART活性的調控，設計使用葉酸-FITC（EC17）作為雙特異性適配器分子，報告者評估了在各種葉酸受體（FR）-陽性腫瘤模型中FITC-CAR-T細胞的性能。研究結果表明，在體內的CART激活和增殖是EC17和腫瘤FR表達依賴關係。觀察到與治療相關的毒性（sCRS），但可以通過調整濃度、劑量頻率或雙特異性適配器管理的時間來輕鬆控制甚至避免。
4.表達CD8β的CAR-iPS-T細胞生產
Kyoto University、Yamaguchi University、Nagoya University
報告者發現在包括他們在內的一些報告中描述再生T細胞有一些與外圍T細胞不同的特徵，特別是它們只表達CD8α，而不表達CD8β。報告者成功生產出進行過修改的表達CD8β的CAR-iPS-T細胞，通過研究CD8β陽性和陰性的iPS-T細胞，報告者發現CD8β陽性的CAR-iPS-T細胞在皮下異種移植模型中與CD8β陰性的CAR-iPS-T細胞相比，表現出增強的抑制腫瘤進展的功能。在體內動力學研究中發現，與CD8β陰性的CAR-iPS-T細胞相比，CD8β陽性的CAR-iPS-T細胞在表達腫瘤部位和增強體內可持續性方面具有更好的功能。這些發現表明，CD8β陽性的CAR-iPS-T細胞可能是基於iPSC的癌症免疫療法的強有力的細胞來源。
5.同種異體CRISPR基因工程抗CD70CART細胞證明了對實體瘤和血液癌細胞的有效的臨床前活動
Crispr Therapeutics,Cambridge
CD70在血液惡性腫瘤和腎細胞癌（RCC）等實體癌症中都有表達，而在正常組織中它的表達僅限於淋巴細胞類型的一個子集。通過CRISPR Cas9基因編輯，產生了靶向CD70的CART細胞。CD70CART細胞也分泌出IFNg，釋放顆粒酶B，並以CD70特有的方式擴增。
6.5T4腫瘤抗原的臨床前研究
Fred Hutchinson Cancer Research Ctr.
癌症睾丸腫瘤抗原5T4是在95%的原發性RCC（腎細胞癌）腫瘤以及其他多種腫瘤類型中表現出來的，而不表達於健康的組織。因此，5T4已經成為癌症患者的抗體和疫苗療法的目標。報告者的研究小組分離出了具有5T417-25和HLA-A2的高活力人類CD8+t細胞克隆，這些克隆體能夠在體外和異種移植瘤小鼠中識別RCC腫瘤。
7.用於治療急性髓系白血病的FLT3 CART細胞治療的生產和評估
Amgen、Kite Pharma、MD Anderson Cancer Center
FLT3（CD135）是一種由造血祖細胞表達的受體酪氨酸激酶，當被配體結合激活時，FLT3信號可以誘導生存、增殖和分化。許多AML患者樣本在循環白血病細胞中保留FLT3表達。與在AML患者樣本中所見的廣泛表達相比，FLT3的正常組織表達僅限於造血室：造血幹細胞的一個子集。在那些表達可量化的FLT3 mRNA（小腦、胰腺）的固體組織中，細胞表面FLT3蛋白是無法檢測到的。報告者進行了FLT3 CAR-T的研究。
8.抗CD123 CAR用於治療BPDCN的臨床前研究
Cellectis SA、Dana-Farber Cancer Institute、Weill Cornell Medical College
幾乎有100%的BPDCN患者出現了CD123高表達，這是一個很有吸引力的治療目標。報告者利用TALEN技術敲除TCRα形成UCART123，UCART123包含一個抗CD123 CAR和一個對利妥昔單抗敏感的RQR8損耗配體。研究者在構建的2個PDX模型中驗證UCART123的效果，有效性獲得肯定，但是通過不同的遺傳機制失去CD123可能會導致逃避UCART123治療並導致複發。
9.全人免疫球蛋白重鏈單源CD33 CAR治療急性髓系白血病
Lentigen Technology Inc、Miltenyi Biotec Company、NIH
研究者利用從全人類CD33片段可變重鏈序列中提取的目標域設計了一種嵌合抗原受體，稱為CAR33VH，並對其進行體外和體內對AML的效力。CAR33VH由一個全人的重鏈可變片段組成，只有抗原結合域，在體外和體內有效地殺死腫瘤，並可用於臨床治療CD33+血液惡性腫瘤。
10.巨噬細胞toll樣受體嵌合抗原受體（MOTO-CARs）作為一種新型的治療實體惡性腫瘤的細胞療法
Brigham Young University
MOTO-CAR細胞是單核細胞衍生的人類巨噬細胞，它們通過慢病毒或腺病毒式的方式進行基因改造，以表達合成腫瘤靶向受體，並分泌細胞因子、配體或趨化因子受體。MOTO-CAR受體由一個單鏈可變片段（ScFv）組成，它與一個特定的腫瘤目標結合，一個連接到跨膜域的鉸鏈，以及一個工程的toll/inter白血病-1受體（TIR）信號域。當ScFv通過它的腫瘤目標與腫瘤細胞結合時，激活信號就會被傳遞，Myd88依賴和獨立的信號級聯被誘導，激活巨噬細胞並將其極化為一種促炎症表型，以一種選擇性的方式消除癌細胞。研究者之前的研究發現胸苷激酶1（TK1）在非小細胞肺癌NCI-H460和A549細胞系的細胞膜上的表達。因此設計了TK1 MOTO-CAR細胞，對其體外功能進行了評估。用共焦顯微鏡的延時視頻記錄了細胞遷移和相互作用。在聯合培養中，與對照組相比，其目標TK1特定的MOTO-CARs顯示，與對照組相比，死亡活動增加了近4倍（p
11.新的治療干預措施，以緩解CART細胞誘導細胞因子釋放綜合征
Memorial Sloan Kettering
研究者發現T細胞-腫瘤的相互作用是需要大量的骨髓細胞在腫瘤部位的招募，包括中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、巨噬細胞、單核細胞和樹突狀細胞。研究者通過激活或抑制巨噬細胞功能來探測骨髓介入的影響，以表明CRS的結果在很大程度上是由巨噬細胞的參與決定的。最終研究結果表明，在嚴重的CRS中，髓系系統是不可或缺的，尤其是巨噬細胞，它代表了迄今為止在臨床前模型中被忽視的細胞組分。
12.分泌封閉免疫檢查點的scFV的CART細胞加強抗腫瘤效果
Memorial Sloan Kettering Cancer Center、Eureka Therapeutics（尤瑞科）
設計CART細胞來分泌PD-1阻斷單鏈抗體（scFv），CART細胞的局部傳遞可以成功地阻止PD-1與PD-L1的結合，從而提高CART細胞治療的整體抗腫瘤功效。
13. CAR19 T細胞分泌抗原靶向融合蛋白對不同的腫瘤類型具有非凡的效力
Aleta Biotherapeutics
研究者通過FP和雙特異性FP（biFP）表達盒，將CAR19 T細胞重定向到其他腫瘤抗原。表達FP或biFP的CAR19 T細胞能解決細胞治療領域的關鍵問題。1）通過在B細胞中加入CD19，促進CAR19 T細胞的擴張、功效和持久性;2）在血液惡性腫瘤和實體腫瘤中處理抗原異基因/逃逸。在pM的濃度下，FP和bifp介導的細胞毒性是非常有效的。
具體的結構為：CAR-CD19結構被創建為FP和biFP表達盒的接收者，它是一個慢病毒載體，帶有MCSV啟動子。該CAR由FMC63 scFv、一個鉸鏈、TM和CD28和/或4-1bb的細胞質信號域和cd3細胞質信號域組成。FP和雙FP的磁帶被設計用來編碼CD19蛋白質的胞外域，然後是一個scFv或VHH到一個（FP）或兩個（biFP）抗原，由一個P2A分裂位點與CAR序列分離。
14.用於安全強化的癌症免疫療法的開關調控CART細胞
研究者設計了可分拆式CAR，其中cd3和胞內共刺激分子在共同表達的組件上被發現是分離的。組件A包括scFv、一個鉸鏈、TM域、蛋白質A和CD28，而第二個組件B包含一個短的胞外區域，沒有腫瘤結合能力，一個TM域，一個蛋白質A的高親和力結合夥伴蛋白質B，和cd3。蛋白質A和B在計算上是由通常不相互作用的人類蛋白質設計的，而在蛋白質-蛋白質相互作用（PPI）的設計上，它們形成了一個異質二聚體，並在實驗中確定了400 pM KD。值得注意的是，這種新穎的PPI被合理地設計為被臨床認可的小分子（蛋白質B的10 pM KD）迅速破壞。
15. TGF-?非敏感性的PSMA特異的CD8+ T細胞
Northwestern Univ、NorthShore University HealthSystem、Rush University
研究者利用TGF-?非敏感性的PSMA特異的CD8+ T細胞誘導PSMA陽性的前列腺癌凋亡。研究者從mCRPC患者外周血收集CD8+T細胞並培養活化，構建T?RIIDN-TK-IRES-PZ1嵌合體T細胞受體逆轉錄病毒結構，它使用了一種抗PSMA IgTCR（ζ）基因（PZ1）和一個佔主導地位的tgf-type II受體（T?RIIDN）陰性受體，可以誘導CD8+T細胞對PSMA反應性和對TGF不敏感。該方法結合了tgf-敏感性和PSMA選擇性，可以顯著提高mCRPC患者的幼稚CD8+T細胞的特異性和抗腫瘤能力，同時通過誘導顯著的腫瘤細胞凋亡來抑制腫瘤。因此，這些特定於PSMA特異性的、TGF-?非敏感的CD8+T細胞可能為初級PCa治療和疾病複發提供一種新的治療干預手段。
16.採用T細胞療法在實體瘤中聯合使用Fas配體介導死亡信號
Fred Hutchinson Cancer Research Ctr.、University of Washington
研究者通過使用病人衍生的細胞系和ID8小鼠細胞系，發現表達人類或小鼠特定的高親和力T細胞受體（TCRMSLN）可以在體外殺死人類或小鼠的卵巢腫瘤細胞。在一個侵襲性的ID8腫瘤模型中，被回輸的TCRMSLN T細胞優先在腫瘤內積累，延遲卵巢腫瘤生長，並顯著延長小鼠的存活時間。然而，研究者發現，腫瘤微環境（TME）的元素限制了T細胞的持久性和殺死癌細胞的能力。
進一步，為了識別在人類和小鼠疾病中活躍於卵巢TME的免疫抑制特性，研究者對整個腫瘤組織（Thermo Fisher）和分離的細胞群（Nanostring）進行基因表達分析。深度轉錄組分析證實了人類癌症和臨床前ID8模型中相似基因特徵的表達，包括免疫抑制途徑。RNA測序結果顯示出了高的Fas配體（FasL）的表達，值得注意的是，FasL信號在腫瘤的產生和持續中起著重要的作用。
為了克服這種潛在的T細胞逃避機制，研究者設計了一個免疫調節融合蛋白（IFP），它包含了Fas受體（Fas）細胞外結合領域，融合到CD28或4-1BB的共同刺激領域。相對於只有TCRMSLN修飾的T細胞，T細胞被設計來表達TCRMSLN和Fas IFP更好地滲透腫瘤，優先擴張/持續，並在轉移到腫瘤小鼠的TME中保留功能。
17.強化T細胞受體（TCR），用於針對MAGE-A4的T細胞治療
Oxford、MD Anderson Cancer Center、Adaptimmune
18.選擇增強T細胞受體的親和力，用於針對MAGE-A10的T細胞治療
Oxford、MD Anderson Cancer Center、Adaptimmune
19.抗GD2嵌合抗原受體T細胞治療組蛋白3 K27M變異瀰漫性中神經膠質瘤
Stanford University
組蛋白3 K27M突變的瀰漫性中線膠質瘤（H3K27M DMG）是一種普遍的致命的小兒腦腫瘤。雖然已經對這種疾病的分子起源有了進一步的理解，但由理解變為臨床上的改進還未實現。迄今為止，在H3K27M DMG中免疫治療應用的目標探索很少。本文報道了在患者衍生的H3K27M DMG的異位移植模型中靶向嵌合抗原受體（CAR）的T細胞靶向雙神經節苷脂GD2的實質臨床前功效。GD2在患者來源的H3K27M DMG培養物中高度表達，並且體外測定顯示出實質性靶標依賴性細胞因子產生和靶細胞殺傷。研究表明GD2抗原表達由H3K27M誘導的轉錄失調所驅動，在體內動物實驗研究中，GD2-4-1BBz-CAR T展現了有效、持久的抗腫瘤效力，且通過體內生物發光成像和組織學隨訪檢測，在腫瘤清除的小鼠體內CAR-T細胞能長期存續。研究者還發現，在腫瘤清除期間抗腫瘤性GD2-CAR T細胞浸潤腦實質並保留局部神經元，因治療並發的神經炎症伴隨著因靶向腫瘤效應會引起的短暫性腦室擴大，其擴大伴隨著短暫的體重減輕，隨後將完全恢復。
20.確定的細胞組成和對JCAR017劑量的精確控制，可以鑒定嵌合抗原受體T細胞產物屬性、藥物動力學和臨床終點之間的關係
Juno Therapeutics
Juno研發團隊認為合理的CD8、CD4陽性T細胞混合的CAR-T細胞具有更好的臨床效果和安全性。JCAR017是一種CD19定向的41BB嵌合抗原受體（CAR）T細胞產品，該產品具有精確劑量的CD8和CD4 CAR-T細胞。與其他混合比例不穩定的靶向CD19的CAR-T細胞相比，JCAR017在治療複發/難治性B細胞非霍奇金淋巴瘤（NHL）的初步安全性數據顯示，細胞因子釋放綜合征（CRS）和神經毒性（NT）出現的概率更低。JCAR017顯示的產品特異性與CAR T細胞記憶表型組成和抗原特異性功能相關。
通過單變數、多變數和程序化的學習分析，研究者評估產品的臨床反應、安全性和葯代動力學相關屬性。在體外CD19對T細胞藥物產品的刺激下觀察到JCAR017記憶T細胞組合物與細胞因子分泌密切相關。具體而言，CCR7 +中樞記憶T細胞頻率升高的產品顯示IL-2產量增加（Spearmanρ= 0.55，P
這一研究表明CCR7+CAR+可能應用於未來CAR-T治療，可以降低劑量爬坡的劑量變化。
21.抗4-1BB治療對於增強CAR-T抗腫瘤反應的輔助作用
PETER MACCALLUM CANCER CENTRE
研究者發現α-4-1BB在加強CAR-T細胞有效性上具有多重作用，包括調動內源性免疫細胞的參與,α-4-1BB目前已經在多種癌症治療的臨床研究中應用。
由於實體瘤的免疫微環境異質性，CAR-T治療在實體瘤治療中療效有限。α-4-1BB可以激活4-1BB（CD137）通路，增強T細胞反應並多樣化提供了強有力的協同刺激信號，研究者假設，α-4-1BB和T細胞治療的結合將會改善抗腫瘤反應。利用靶向Her2的CAR-T聯合α-4-1BB，研究者發現α-4-1BB可以增強CAR-T抗腫瘤有效性，還發現α-4-1BB可以降低腫瘤局部的免疫抑制細胞，包括調節T細胞（Tregs）和骨髓衍生抑制細胞（MDSCs），並且在瘤內淋巴結髮現增加的內源性T細胞和DC細胞，這些均與增加的治療反應有關。
22. IL-13Rα2特異的CAR-T聯合PD-L1特異性調節受體能夠加強膠質瘤抗腫瘤活性
23.利用內源性PDCD1啟動子啟動表達的IL12可以加強CAR-T活性
Bluebiridbio
免疫檢查點基因程序的細胞死亡1（PDCD1）是T細胞功能的調節劑，在T細胞激活後高度上調，抗體和核酶介導的PD-1信號通路的失活已經被證明可以增強CAR T細胞的功能。藍鳥公司研究者利用megaTAL/同源定向修復技術，通過PDCD1特異的megaTAL與包含兩側具有PDCD1同源區域的無啟動子IL12基因的AAV6共轉染，在PD-1基因位點插入IL12基因，獲得基因工程T細胞。該CAR-T即可以消除PD-1表達對T細胞的影響又可以增強T細胞活性。最後，研究者預測megaTAL genome editing/homology directed repair（HDR）技術將在實體瘤CAR-T治療中發揮重大作用。
24. CRISPR/CAS9系統敲除B2M、TRAC的同種異體靶向BCMA CART細胞
25.靶向FLT3嵌合抗原受體T細胞在治療急性淋巴細胞白血病中可以誘導B細胞向T淋巴細胞系的轉變
University of California Riverside School of Medicine、University of Pennsylvania
FLT3是區分KMT2Ar型ALL和非KMT2Ar型ALL的特異性基因，而80%的嬰兒ALL均是KMT2Ar型ALL。研究者在進行靶向FLT3的CAR-T研究時意外發現，FLT3 CAR T可以誘導嬰兒的ALL表型從B細胞型轉換為T細胞型。研究者利用FLT3 CAR T治療ALL後發現複發的ALL細胞不再表達FLT3和CD19分子，反而表達CD3、CD4或CD8 T細胞相關的分子表型，而後續研究者利用CD19 CAR治療KMT2Ar B ALL，發現複發的ALL均轉換為髓系表型。這一發現表明，CAR-T細胞引起的免疫壓力可能會驅動白血病的不同表型轉換。
26.化療和T細胞功能障礙的小兒科患者CAR-T治療的療效受到限制
Children"s Hospital of Philadelphia
研究者分析了157名兒科癌症患者的外周血T細胞，並確定了與CAR細胞潛力相關的關鍵代謝變化。研究者收集了急性淋巴細胞白血病（ALL）、非霍奇金淋巴瘤（NHL）、神經母細胞瘤、骨肉瘤、橫杆肌肉瘤、威爾姆斯、霍奇金、慢性骨髓性白血病和Ewings肉瘤的共157例患者診斷和每次化療後的外周血血液樣本。研究者注意到持續化療的患者CAR-T治療的潛能在下降。
在體外試驗中，暴漏於化療環境下，對一些Native T細胞和記憶T細胞的毒性特別大，這可能與CAR T細胞的低的療效相關。進一步，研究者發現環磷醯胺和多索黴素的治療方案嚴重耗盡了患者的T細胞潛能。這些化療藥物在體內化療後，會造成病人T細胞的線粒體功能紊亂，強制使用像棕櫚酸鹽這樣的脂肪酸有助於恢復化療暴露T細胞中的SRC（spare respiratory capacity）。
該研究表明，低比例的Native T細胞，依賴於糖酵解途徑並且具有低的SRC的CAR-T細胞具有差的療效，而這種差的療效的CAR-T與化療藥物的應用密切相關，因此後續在進行實體瘤的研究中，前處理化療藥物的選擇以及化療後治療時間間隔，可能對CAR-T的療效均有重要作用。
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