A型塞尼卡病毒的分離鑒定及生物學特性研究

導 讀

本文報道了對分離自湖北地區的A型塞尼卡病毒（Senecavirus A，SVA）CH-HB-2017毒株進行鑒定和生物學特性研究。全基因序列分析顯示，該分離株與國內毒株CH-HN-2017、CH-HNSL-2017、CH-FJ-2017同源性高。該SVA可在豬腎傳代細胞（IBRS-2）和豬睾丸細胞（Swinetestis cells，ST）中複製增殖，感染後都能產生細胞病變（Cytopathic effect，CPE），通過病毒一步生長曲線、蝕斑試驗和定量PCR等試驗表明，該毒株對IBRS-2細胞更易感，病毒滴度更高。

研究背景

A型塞尼卡病毒（Senecavirus A，SVA）也稱為塞尼卡谷病毒（SenecaValleyvirus，SVV)，屬於小RNA病毒科塞尼卡病毒屬。2002年，美國一家公司在細胞培養物中偶然發現了A型塞尼卡病毒（SVA），SVA最初被認為是細胞培養物中的污染物，推測其來源於豬的胰酶或胎牛血清。2015年3月，該病首次在我國廣東某豬場暴發，之後在福建、湖北、河南等省份也有該病發生的報道。然而，目前國內對該病原的生物學特性研究甚少，因此本試驗對疑似SVA感染豬的水皰液/水皰皮進行病毒的分離和鑒定，並對病毒進行生物學特性研究，為該病的防控提供理論參考。

結果速覽

1、SVA全基因序列比較分析結果

將SVACH-HB-2017全序列與GenBank中發表的21株SVA毒株全序列進行了比對，該毒株與國內2017年毒株親緣關係較近，與2015年美國公布的毒株親緣關係也較近，但單獨形成一個分支。

Fig1：A型塞尼卡病毒（SVA）CH-HB-2017全基因組的系統進化樹

2、SVACH-HB-2017生物學特性研究

將SVA CH-HB-2017分別感染IBRS-2細胞和ST細胞後，通過一步生長曲線、熒光定量PCR等試驗表明，該毒株對IBRS-2細胞更易感，病毒滴度更高。

Fig 2：A型塞尼卡病毒（SVA）CH-HB-2017在細胞中的增殖曲線

3、SVA CH?HB?2017 的間接免疫熒光檢測

將5個MOI的SVA CH?HB?2017 分別接種IBRS?2 和ST 細胞，並設置未接毒組，感染8h後用4%多聚甲醛固定細胞。熒光顯微鏡觀察發現，未接毒的IBRS?2 細胞僅出現微弱的非特異性熒光，而感染SVA CH?HB?2017 的IBRS?2 細胞則呈現出較強的特異性免疫熒光，有些細胞中熒光充滿整個細胞質，有些則多聚集於核周圍的病毒複製區（圖3A）；對於ST 細胞，未接毒組細胞的細胞核及核周圍區域出現微弱的非特異性熒光，而感染SVA CH?HB?2017 的細胞則顯示較強的特異性熒光，且多數細胞的熒光聚集於細胞核周圍的病毒複製區域（圖3B）。

Fig 3：間接免疫熒光檢測A型塞尼卡病毒（SVA）CH-HB-2017病毒

結語

近兩年豬群中新發的SVA引發的水皰性疾病不斷出現，給養豬行業帶來了很大的危害。但如今SVA疫苗和相關診斷產品仍未上市，我國豬群缺乏免疫屏障，而該病的傳染性又極強，因此研發行之有效的SVA疫苗和相應的診斷試劑顯得迫在眉睫。

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