一種更安全無毒副作用的HIV治療技術——自體移植

研究人員已經將基因改變引入到人體T細胞中，使其實際上對艾滋病毒感染免疫，並且在接受這些細胞接種的艾滋病毒陽性患者停止治療後，他們的病毒載量反彈得更慢，最近一次關於逆轉錄病毒和機會主義感染的會議（CROI 2019）報告。

現在的挑戰是增加體內修改免疫基因的細胞比例。這可能導致功能性的HIV治療，即使沒有HIV藥物，病毒也無法複製。

CROI 2019的頭條新聞是第二個人可能已經治癒了艾滋病毒感染。但大多數報告也強調，實現這一治療的骨髓移植手術，以及12年前蒂莫西·雷·布朗（Timothy Ray Brown）的前一個手術，是危險的、昂貴的，而不是對一個沒有癌症的患者進行的嘗試。

那麼，類似的壯舉能更安全地實現嗎？動物實驗中有希望的結果是，猴子的細胞中大部分的HIV DNA都被移除了。

但是，第二項研究，這次在人類身上，通過一種安全的、可重複的技術，再現了治癒這兩個病人的基因改變。這兩名治癒的患者的T細胞被來自捐贈者的T細胞替換成了一種叫做CCR5 delta 32的基因突變類型，這意味著他們的細胞表面沒有CCR5受體分子，大多數HIV株在感染細胞之前都需要附著在這些分子上。

在費城賓夕法尼亞大學的Pablo Tebas博士提出的實驗中，從15名艾滋病患者身上提取的T細胞在實驗室培養皿中用一種叫做鋅指核酸酶（ZFN）的基因編輯酶進行培養。這改變了他們的CCR5基因，使其變為抗艾滋病毒的變體。然後，細胞被重新導入患者體內，這就是所謂的自體移植——也就是說，改良後的移植來自患者自身，所以排斥反應應該沒有問題。

這不是一項新技術：ZFN酶被用於修飾細胞實驗，最初在2011年報告給CROI。在這項實驗中，一種病毒載體——一種常見的感冒病毒的外殼——被用來將ZFN酶導入細胞。重新引入的CCR5陰性細胞最初佔T細胞總數的22%，但隨著時間的推移被患者自身的CCR5陽性細胞所取代。

然而，當前的一組實驗使用稱為電穿孔的不同技術將ZFN進入細胞。使用病毒載體的問題是細胞對它們產生免疫力，因此它們只能使用一次。電穿孔可以多次使用以產生可以接種的多個循環的修飾細胞。在這項技術中，T細胞在有電流的情況下與ZFN酶一起在室內培養。這會導致細胞壁變得通透性，ZFN或其他物質會擴散到細胞中。

除了使用一種不同且可重複的技術來創建自體的CCR5陰性T細胞外，實驗還探索了其他幾種可能性。首先，如果在接種前使用低劑量的免疫抑製藥物（環磷醯胺）以減少體內的CCR5陽性細胞的數量，是否可以增加體內T細胞的比例？第二，雖然只有1%的北歐血統的人有兩個CCR5 delta 32基因拷貝，這意味著他們實際上對艾滋病毒免疫，但更大比例（高達20%）的人有一個該基因拷貝（所謂的雜合性）。他們會有更好的反應嗎？

本研究共有15人參加，共五組，每組3人。三個人沒有接受環磷醯胺治療。6人——3人是CCR5的雜合子，3人沒有delta-32突變的拷貝——接受了較低劑量的環磷醯胺，6人接受了較高劑量的環磷醯胺。Tebas博士說，這些劑量不足以產生明顯的毒性，而且與治療自身免疫性疾病狼瘡的劑量差不多。

CCR5陰性T細胞的產生大約需要10周，在細胞輸注前2天給予環磷醯胺。8周後，所有CD4計數高的HIV陽性患者（平均CD4計數831拷貝/mm3）停止了抗逆轉錄病毒治療（ART）。分析性治療中斷（ATI）是一個固定的16周的時間段，儘管在這段時間之後，如果人們仍然有一個低病毒載量，他們可以選擇延長ATI。研究發現，事實上，CCR5-雜合子組中的一個人繼續服用他們的ART並被排除在分析之外。

沒有與研究治療相關的顯著不良事件。單劑量電穿孔技術至少與使用腺病毒載體一樣有效：輸注後立即，25%的受試者T細胞為CCR5陰性。

在該研究中沒有病毒緩解的病例：在ATI期間，所有受試者中的HIV病毒載量再次出現並且CCR5陰性的T細胞的比例緩慢下降。 CCR5-雜合子受試者傾向於保留較高比例的CCR5陰性接種細胞。在ATI之前的四周，在兩個純合子（兩個基因CCR5陽性）組中被修飾的T細胞的比例分別為4.6％和4.1％，而在雜合子組中為7.4％，並且在第24周，在ATI四周之後，比例分別為2.2％，2.6％和4.6％。

環磷醯胺對病毒反彈時間沒有影響。

雜合子患者的病毒載量也出現得更慢。50%的純合子患者已經在其ATI四周內可檢測到病毒載量，但是在雜合子患者中有五分之三的患者需要整整12周。

三名受試者在ATI結束時的病毒載量較低，並決定延長。一名純合子患者在ATI結束時病毒載量不可檢測，並延遲至12周後再啟動，病毒載量為10000 copes/ml。其中兩名雜合子患者在1000 copies/ml區域內有病毒載量，在其ATI結束後20周和32周內，病毒載量分別為8000 copies/ml，才重新啟動ART。

因此，雖然這項實驗沒有產生長期的病毒抑制患者，但這是一種更安全、更可重複和無毒的方法，可以創造一個能被注入體內的抗艾滋病T細胞群，在某種程度上可以延遲艾滋病病毒的反彈，即使它們只形成人體內不足10%的T細胞補體。

當被問及未來的步驟時，Tebas博士說，與其簡單地重複同樣的技術來設計CCR5陰性細胞，他的團隊將研究使用ZFN技術來產生缺乏其他HIV共受體的細胞，即C4CR4，並最終產生CRT T細胞–嵌合抗原受體細胞，一種人工設計的T-細胞已經被用於抗癌治療，它將能夠發現並摧毀感染了HIV的T細胞。

原 文 出 處

『Gentler cure』 technique produces delay in viral rebound in some people taken off HIV therapy

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