細胞培養中常見的污染情況及解決方法

細胞培養中常見的生物污染類型有細菌污染、黴菌污染、支原體污染、黑膠蟲污染、真菌污染、原蟲污染等。那麼它們在細胞培養中污染的特點如何以及相應的解決方法是什麼呢？小編為大家整理如下，希望對大家有用哦~

1. 細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。

解決方法：仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象！可在培養液中加相應的抗生素處理，如四環素，慶大黴素，或者鏈黴素。

2. 黴菌：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之後，細胞的活力狀態變差。

解決方法：用硫酸銅溶液擦拭CO?孵箱內，再把水盤裡也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止黴菌污染。

CO?孵箱被黴菌污染後，可把所有細胞暫時轉移，採用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。並把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽瀰漫。待過氧乙酸的氣味消散後，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節。

其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。

預防黴菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性黴素或制黴菌素或放線菌素D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制黴菌素或放線菌素D或雙抗都於事無補，建議捨棄該污染細胞。，將環境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。

3. 支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以後，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。

解決方法：支原體污染細胞後，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有：抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理。要注意的是：支原體沒有細胞壁，故作用於細胞壁生物合成的抗生素，如內醯胺類、萬古黴素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐火藥。對支原體最有抑制活性抗生素是四環素類、大環內酯類等，氨基糖苷類、氯黴素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養用物。通常，濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的。

4. 黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。

解決方法：對細胞生長狀態不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之後會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。

5. 真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那麼容易被發現，但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。

解決方法：果斷扔掉，然後徹底消毒滅菌培養間， CO?孵箱，器皿和培養液。

6. 原蟲：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。它們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的，但它們的數量小，細胞佔優勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當它們到達一定的數量時就會影響到 細胞 的生長，最終形成惡性循環。

解決方法： 污染的可能原因很多，比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等，如果細胞很多的話，直接扔了重新復甦細胞，如果是保種細胞的話，可購買相關的滅菌試劑。

污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等 。

關於培養基的無菌狀況，取培養基至培養瓶中（不加細胞），37度試培養一段時間後觀察。如果沒有細菌生長 就是操作的問題。

也可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈黴素和氨苄青黴素）。但雙抗有時會影響細胞的狀態，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。

1、孵箱應定期用三氧機消毒 或者 紫外光照射，並用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水

2、超凈台取材器材培養液培養瓶操作等因

3、超凈台的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致黴菌污染

4、無菌室經甲醛熏蒸消毒後，可用同等量的氨水噴洒中和，約幾小時即可進入操作。