北京4月份基因編輯技術專題學習班通知

通知要點：

由實驗操作大牛主講的CRISPR/Cas9基因編輯技術專題學習班將於4月22～23日在北京冠京飯店舉辦，現報名中，報名方法見文末。本次學習班將深入系統的講解基因編輯知識，同時講解實驗操作容易遇到的問題及注意事項、解決方法。學員與老師同時組建微信群深入交流探討，幫助解決後續實驗過程中遇到的技術及理論問題。可提前準備好自己科研中遇到的問題。

開展背景

基因編輯技術指能夠讓人類對多個物種內的目標基因進行「精確編輯」，實現對特定 DNA 片段的刪除、插入、定點突變等。與傳統的 TALEN 和 ZFN 基因編輯技術相比，CRISPR/Cas9技術自問世以來，以其操作的便捷性，高效的基因編輯能力獲得青睞，成為當下科研工作者的新寵兒。目前該技術已廣泛應用於人、大鼠、小鼠、斑馬魚、果蠅、豬、水稻、小麥和擬南芥等動植物（細胞）以及細菌等微生物的基因組靶向改造，並已在功能基因組研究、疾病防治、動植物育種、動物疾病模型開發、基因治療等領域展現出巨大的應用前景。

大量從事醫學和生命科學的研究者，都將會在自身的研究領域中用到 CRISPR/Cas9基因編輯技術，但在實際操作中，由於各種原因常常遭遇技術瓶頸，因而無法順利地達成實驗目標。為此，特於4月22日-23日在北京舉辦以 CRISPR/Cas9為主要內容的基因靶向修飾技術專題學習班。

本次學習班將深入系統的講解基因編輯知識，同時講解實驗操作容易遇到的問題及注意事項、解決方法。學員與老師同時組建微信群深入交流探討，幫助解決後續實驗過程中遇到的技術及理論問題。可提前準備好自己科研中遇到的問題，通過現場及後續的交流探討，全面掌握 CRISPR/Cas9技術應用的方法及技巧，避開科研路上的彎路和陷阱，輕鬆成為科研達人。

主辦單位

莫速乎科研教育（上海莫速乎教育投資有限公司）

上海荊麥信息科技中心

主講專家

主講專家來自中國農業科學院，先後參與並承擔973、863、國家自然基金課題及轉基因重大專項課題。研究領域為基因組編輯、體細胞核移植、疾病模型的建立以及胚胎髮育過程中表觀遺傳學研究等。有豐富的理論和實際研究經驗。學員通過與專家直接交流，能夠分享到這些頂尖學術機構的研究經驗和實驗設計的思路。學員通過集中專題學習後能夠擴展思路，在研究技術方面領悟更多。

課程安排：（具體課程進度根據實際反饋情況進行適當調整）

第一天上午8:30-11:30

一、基因編輯技術

1、基因打靶技術

2、細胞基因組 DNA 的修復機制

3、基因敲除與基因敲入

4、ZFNs、TALENs 技術

二、CRISPR/Cas9基因組編輯技術原理

1、CRISPR/Cas系統

1.1、CRISPR/Cas系統的發現

1.2、CRISPR/Cas系統的組成

1.3、CRISPR/Cas系統的工作原理

2、CRISPR/Cas9技術的發展及其應用

2.1 CRISPR/Cas9技術的建立

2.2 CRISPR/Cas9技術的應用

2.3 CRISPR/Cas9技術的脫靶問題

第一天下午13:30-17:00

三、CRISPR（sgRNA）的設計與製備

1、目標基因結構及功能的生物信息學分析

2、gRNA 的設計（在線互動設計演練）

3、sgRNA 模板的製備

4、sgRNA 表達載體的構建

4.1 sgRNA 的體外表達

4.2 sgRNA 在哺乳動物細胞中的表達

5. 以上內容相關實驗的注意事項、實驗技巧、實驗結果講解

四、Cas9的選擇與製備

1、Cas9的選擇

1.1 Cas9蛋白的結構特點簡介

1.2 Cas9的密碼子優化

2、Cas9表達載體的構建

2.1 Cas9的體外表達

2.2 Cas9在脊椎動物細胞中的表達

3、以上內容相關實驗的注意事項、實驗技巧、實驗結果講解

第二天上午8:30-11:30

五、sgRNA 活性驗證

1、Indel 突變檢測的基本策略

2、基於細胞系活性驗證方法

2.1 PCR 產物酶切檢測及利用 ImageJ 軟體計算活性。

2.2 PCR 產物亞克隆測序法

3、基於胚胎的活性驗證方法

4、以上內容相關實驗的注意事項、實驗技巧、實驗結果講解

六、利用 CRISPR/Cas9技術創建基因組編輯人及動物細胞系

1、目標基因的基因組組成分析

2、基因組編輯策略設計

2.1基因敲除

2.2基因敲入

2.3定點突變

2.4大片段刪除

3、sgRNA 的設計與活性驗證

4、用於基因敲入的供體 DNA 的設計

4.1 ssODN（單鏈 DNA 供體）

4.2 雙鏈 DNA 供體

5、質粒（和/或供體）導入細胞系的方法（脂質體轉染，電轉，病毒轉導）

6、陽性克隆篩選

6.1目標基因組 DNA 片段的 PCR 擴增

6.2PCR 產物酶切檢測

6.3PCR 產物亞克隆測序

7、基因組編輯細胞系的建立

8、提高基因敲入（同源重組）效率的策略

9、以上內容相關實驗的注意事項、實驗技巧、實驗結果講解

第二天下午13:30-17:00

七、利用 CRISPR 技術創建基因組編輯動物

1、目標基因的基因組組成分析

2、基因組編輯策略的選擇

2.1基因敲除

2.2基因敲入

2.3定點突變

2.4大片段刪除

3、sgRNA 的設計與活性驗證

4、用於基因敲入的供體 DNA 的設計

4.1 ssODN（單鏈 DNA 供體）

4.2 雙鏈 DNA 供體

5、通過顯微注射法向受精卵中導入sgRNA/Cas9 mRNA/供體 DNA

6、胚胎中基因編輯效率的檢測

6.1 單細胞 PCR 擴增

6.2 PCR 產物測序驗證

7、胚胎移植，獲得基因編輯個體

8、基因編輯動物 F1代的鑒定

9、通過體細胞克隆法獲得基因編輯動物

9.1 供體細胞分離、培養

9.2 供體細胞的基因編輯

9.3 體細胞核移植操作

9.4 胚胎移植

9.5 基因編輯個體的鑒定和擴繁

八、基因組編輯技術的脫靶問題

1、脫靶的產生原因

2、脫靶檢測方法

3、如何解決脫靶問題？

4、脫靶問題對不同領域研究者的意義

九、CRISPRi 基因表達抑制技術以及 CRISPRa 基因表達激活技術

1、dCas9的特徵簡介

2、運用 CRISPR 技術調控基因在細胞中表達的基本實驗過程

3、CRISPR 技術介導的轉錄抑制（CRISPRi）

4、CRISPR 技術介導的轉錄活化（CRISPRa）

十、基因組編輯技術的前景展望

1、基因組編輯技術對未來社會的革命性影響

1.1 功能基因組研究（功能獲得性研究、功能缺失性研究）

1.2優良經濟性狀動植物新品種的選育

1.3人類疾病的動物模型的建立

1.4 基因治療

2、基因組編輯技術的倫理學問題

具 體 事 項

研討會時間地點

北京：北京冠京飯店

北京市丰台區丰台北路79號(近豐體南路)，地鐵9號線七里庄站A2口出

2017年4月22日～23日（21日下午報到）

參會對象

從事生物、醫學、理工、農業等各科研專業，需要發表SCI文章的科研工作者及碩士、博士研究生，年資不限，各有收穫。

註冊費用

2400元/人，三人以上團體2200元/人

按繳費先後順序確定座次；註冊費含會場、專家講課費、教材、午餐、稅費。不含住宿費。

繳費賬號

開戶行：中國建設銀行（上海市泗涇支行）

戶名：上海荊麥信息科技中心

銀行賬號：3100 1983 0100 5002 2781

備註寫明：姓名+基因編輯 以便於查詢

少數單位轉賬時需提供我方開戶銀行行號：1052 9008 0036

如通過支付寶轉賬須支付到：（支付寶無法轉賬到企業銀行，只能轉賬到企業支付寶）

戶名：上海莫速乎教育投資有限公司

支持現場刷卡或支付現金。

住宿（不強行規定，可以自己預訂住宿，費用自理。）

北京冠京飯店

地址：北京市丰台區丰台北路79號（近豐體南路），地鐵9號線七里庄站A2口出

標準間：300元/間/晚 （含早餐、含寬頻）

備註：住宿統一安排，費用自理，辦理住宿時告訴前台是參加此學習班的即可，住宿費辦理住宿時交給酒店前台。住宿費發票將在退房時由酒店開具給您。

報名諮詢

其他說明

1、會議報到：4月21日下午15:00-21:00，在酒店大廳報到領取教材。提前到達酒店者，可先辦理住宿，待15:00之後到酒店大廳報到領取教材。本地學員可第二天早上8:30開課前報道即可。會議下午5點結束。中午有午餐及休息時間一個半小時。會議含統一午餐。

2、會議無需電腦、滑鼠。

3、會議期間領取發票。隨發票一同發放的還有經過蓋章的紙質版會議邀請函，以便於大家報銷費用時作為會議憑證。如需要用來預支付費用，可以郵件索要經蓋章的PDF版本的邀請函，您先將它列印出來拿去財務預支費用，均屢試不爽。

4、如果您針對基因編輯方面有何疑問，請帶著問題來，並可與授課老師當場交流。

5、本次學習班不進行現場試驗，因為那樣過於浪費時間，我們會重點將個方面包括試驗中遇到的問題一併講解討論。

報名方法

報名郵件內容模板：

我想報名參加4月份的CRISPR/Cas9基因編輯技術專題學習班，以下是我的信息：

1、姓名：

2、性別：

3、單位：

4、郵箱：

5、手機：

6、發票抬頭：如不確定，先留空。

7、是否預訂住宿：我們預訂的住宿時間是從會議前一晚到會議最後一天中午退房。共兩晚，如果有特殊需要請註明。

8、備註：備註說明寫在此，如有多人參加，請將姓名、性別、郵箱、手機在上面分別單獨列出，備註中寫明一位主要聯繫人。

關於報名的說明：

1、報名截止時間：收到通知到每場會議開始的前一天均可報名。但儘早報名繳費能獲得更好的座位。

2、請務必留意會議主辦單位，是否為「莫速乎教育」；

3、務請發到指定報名郵箱，而不要直接回復收到的通知郵件；

4、您發送後24小時內會收到我們更詳細的報到通知等說明，如2天後依然未收到請再次聯繫我們；

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