不要只羨慕別人家研究的磷酸化蛋白質組學！

為什麼要富集呢？

首先，磷酸化肽段的信號通常較弱，因為它們帶負電荷，而電噴霧質譜在正電模式下工作，因此電離效果不好。其次，在大量非磷酸化蛋白的高背景下，很難觀察到低丰度目的蛋白的信號。

質譜檢測有什麼優勢吶？

質譜在鑒定蛋白上具有出色的靈敏度和解析度，其可以檢測複雜的蛋白混合物中大規模的磷酸化蛋白，包括磷酸化蛋白和磷酸化肽段的鑒定，以及磷酸化殘基的測序。

下面小編給大家介紹幾篇磷酸化蛋白質組學分析的文章。

Immunity

IF:22.845

樣品類型：細胞

研究方法：蛋白質組學，磷酸化蛋白質組學，TMT

摘要

第一篇是2017.03.21發表在Immunity上研究T細胞激活信號網路和通路的文章，作者結合蛋白質組學和磷酸化蛋白質組學，並通過TMT同位素標記技術分析，揭示了動態信號網路和T細胞活化的生物學途徑。

研究結果

作者通過TMT同位素標記和LC/LC-MS/MS技術分析天真T細胞和經CD3抗體，CD28抗體刺激後2h，8h，16h後的T細胞的蛋白質組和磷酸化蛋白質組。總共定量了8431個蛋白質和13755個磷酸化肽(FDR

小結

作者以其清晰嚴謹的思路，應用多層次蛋白質組學分析和系統生物學描繪了T細胞蛋白質組和磷酸化蛋白質組的風貌，識別調節T細胞靜止退出的信號網路和生物能學途徑，證明氧化磷酸化和線粒體激活在抗原誘導T細胞反應中的功能和機制。

Blood

IF:13.164

樣品類型：血小板

研究方法：磷酸化蛋白質組學，iTRAQ，絕對定量PRM技術

摘要

作者應用磷酸化蛋白質組學研究ADP調節信號。此外，模仿內皮衍生的環前列腺素的拮抗效果，證明伊洛前列素（Iloprost）如何逆轉ADP調節信號。共鑒定到4797個磷酸化肽段，其中608個顯著差異。ADP介導的磷酸化激活主要發生在早期（前10s），ADP和Iloprost干擾PDE3ASer312, CALDAG-GEFISer587, ENSASer109等位點磷酸化效應相反，可能是藥物作用的中心靶點。

實驗流程

研究結果

為什麼只放這一個結果？

原諒小編欲罷不能的稀飯這樣美貌與智慧並存的圖，想知道這是what，可以去看看哦！

Nature Communications

IF:12.124

樣品類型：寄生蟲

研究方法：蛋白質組學，磷酸化蛋白質組學，iTRAQ

摘要

鈣依賴蛋白激酶是瘧疾寄生蟲鈣信號的關鍵效應蛋白。PfCDPK1對惡性瘧原蟲無性繁殖發展至關重要，但其明確的功能和底物在很大程度上仍未知。作者通過綜合多學科方法，包括定量蛋白質組學和磷酸化蛋白質組學，闡明了激酶入侵宿主紅細胞的分子機制。

圖1.定量蛋白質組學和磷酸化蛋白質組學實驗流程

研究結果

研究證明PfCDPK1參與調節關鍵模塊，如寄生蟲的IMC和cAMP信號通路，PfCDPK1磷酸化PfPKA亞基(PfPKA-R)，調節PfPKA活性，入侵宿主紅細胞。

大家是不是發現什麼特點，這三篇文獻中都採用了iTRAQ或TMT同位素標記，是不是所有的樣品都採用同位素標記檢測的效果才好呢，對於常規組織、細胞的磷酸化推薦採用這種標記方法，細菌磷酸化建議採用非標記也就是Label free技術，為什麼有樣品歧視呢？因為細菌磷酸化水平非常低，很難達到標記所需的起始量，但如果老師的樣品量足夠足夠大也是可以的。

重點在這兒

現在蛋白質磷酸化的研究越來越多，一般的研究思路：先檢測總體的磷酸化水平，再篩選出差異表達的蛋白和肽段進行分析，最後就努力的驗證了。

最後附上我們的送樣要求，如果老師想詳細了解樣品的取樣方法和送樣量，可與我們的小美聯繫。

參考文獻

1. Tan H, Yang K, et al., Integrative Proteomics and Phosphoproteomics Profiling Reveals Dynamic Signaling Networks and Bioenergetics Pathways Underlying T Cell Activation. Immunity. 2017 Mar 21;46(3):488-503.

2. Beck F., Geiger J., et al., Temporal quantitative phosphoproteomics of ADP stimulation reveals novel central nodes in platelet activation and inhibition. Blood. 2017 Jan 12; 129(2): e1–e12.

3. Kumar S., Kumar M., et al., PfCDPK1 mediated signaling in erythrocytic stages of Plasmodium falciparum. Nat Commun. 2017 Jul 5;8(1):63.

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