抗體誘導人呼吸道合胞體病毒融合蛋白髮生內化，附文獻全文！

編者按

近日，比利時，美國，西班牙和英國的科學家聯合在Journal of Virology的雜誌上發表題為「Antibody-induced internalization of the human respiratory syncytialvirus fusion protein」的文章。該研究通過使用特異性結合RSV感染細胞後表達於細胞表面蛋白的抗體，來揭示抗原-抗體複合物結合後的內化過程。該研究揭示了抗原-抗體複合物的內化作用，一方面可干擾病毒顆粒的形成及增殖達到抗病毒的效果，另一方面這一內化機制也降低了抗體對感染細胞介導效應機制的效果。

人呼吸道合胞體病毒（RVS）是一種能夠造成孩童，老人及免疫功能不全的病人嚴重下呼吸道感染性疾病的病毒。基本上所有兩歲的孩童，在RVS暴露的時候都會發生感染。同時早產，支氣管肺發育不良及先天性心臟病也是發生嚴重RVS疾病的重要風險因素。成人RVS感染也可造成嚴重疾病，甚至導致終身RVS的反覆感染。儘管在1956年的時候就已經發現了RVS的存在，但目前還沒有安全有效的疫苗來防控RVS。對於嚴重感染病例的治療還是通過平衡機體的水合及氧化作用的基本支持性療法。

RVS屬於肺病毒科，偏肺病毒屬的負鏈RNA病毒。RVS基因組全長15.2Kb，其中包含10個基因編碼11個蛋白。在這些編碼的蛋白中，G糖蛋白、小疏水蛋白和F蛋白為RVS表面糖蛋白。F蛋白能夠融合病毒和細胞的膜，並促使感染的細胞融合臨近的細胞，形成大的合胞體。F蛋白是RVS在體外複製過程中必不可少的蛋白。該蛋白的保守性強，包含有6個主要的抗原位點，容易刺激機體產生中和性抗體，是保護性疫苗開發的首選。目前，RVS的F蛋白是免疫預防及疫苗研究主要關注點。預防性接種F蛋白特異性抗體能夠防止嬰兒RVS感染後疾病的惡化。然而，在自然感染RVS後建立的抗體應答無法保護病毒的再次感染，高水平的抗體滴度與保護力之間不呈相關性。因此，科學家們推測RSV可能潛在有干擾抗體介導中和作用的能力。

1、抗體誘導RSV抗原內化作用：為了評估抗體誘導RVS抗原的內化作用，研究人員首先使用RSV感染的HEp-2和A549細胞孵育羊抗RSV多克隆抗體1h，之後固定細胞，用AF488驢抗羊IgG抗體孵育。結果發現在試驗的初期，熒光信號主要出現在細胞的表面，在細胞質中沒有熒光信號。在試驗1小時後，細胞質中發現了大量的熒光信號，同時細胞表面的在減少。

3、在分化良好的原代支氣管上皮細胞（WD-PBECs）中研究抗體誘導RSV抗原內化作用：研究人員通過使用WD-PBECs及人抗RSV特異性抗體，發現在試驗120min之後超過80%的RSV感染細胞出現了RSV抗原-抗體複合物的內化。

4、確定參與內化過程的細胞表面RSV蛋白：4、確定參與內化過程的細胞表面RSV蛋白：RSV表面糖蛋白F和G是連個主要的表面抗原。研究人員通過使用兩種不同的細胞（HEp-2和A549）、F蛋白特異性抗體和G蛋白特異性抗體發現兩種蛋白都有大量抗原-抗體複合物的內化（圖A），得到的也是相似的結果（圖B）。表面糖蛋白和是連個主要的表面抗原。研究人員通過使用兩種不同的細胞（和）、蛋白特異性抗體和蛋白特異性抗體發現兩種蛋白都有大量抗原抗體複合物的內化（圖）。通過單獨轉染的和蛋白至細胞研究，得到的也是相似的結果（圖）。

5、抑製劑和DN蛋白對抗體誘導RSV F蛋白內化作用的影響：研究人員通過使用RSV F蛋白抗體分別和不同濃度的內吞抑製劑，醯胺化動力蛋白抑制肽DIP（圖A），金剛烷胺（圖C），和制黴菌素（圖E）混合後孵育於RSV感染HEp-2細胞。結果表明DIP能夠減少大約50%內化囊泡。通過使用共轉染DN蛋白（動力蛋白2（圖B），Epsl15（圖D），窖蛋白-1（圖F）），發現動力蛋白2能夠顯著降低內化囊泡（62.01%）。

6、自發內化作用分析：研究人員通過使用不可透過膜的生物素標記試劑標記RSV感染和未感染的HEp-2細胞，來研究RSV的F蛋白的自發內化作用。結果發現，在抗體誘導和自發內化兩種情況中，細胞內RSV的F蛋白的數量是不同的。該結果證實RSV的F蛋白的內化作用主要是由於抗體誘導的。

7、Fab片段的內化作用：為了鑒定RSV的F蛋白內化是否需要交聯耦合作用，研究人員使用RSV的F蛋白特異性單克隆抗體的單價Fab片段與完整的抗體進行對比試驗，結果發現單價Fab片段誘導的RSV F蛋白內化作用與完整抗體相比顯著降低，說明交聯耦合作用在RSV F蛋白的內化過程中起到了重要作用。

本期編輯：木木

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