J Virol：解析病毒轉錄新機制

來自武漢大學生科院，Lerner研究所（Lerner Research Institute）的研究人員發現水泡性口炎病毒VSV磷酸蛋白的三個磷酸化位點突變之後，會剝奪了功能性N-RNA模板的形成，從而影響病毒的轉錄複製。這不僅有助於分析磷酸化在磷酸蛋白P3A中所起的作用，而且也能揭示一些傳染病病毒的>。相關成果公布在1月Journal of Virology雜誌在線版上。

文章的通訊作者是武漢大學生命科學學院教授陳明周博士，第一作者為陳龍雲博士。這一研究組主要研究方向為RNA 病毒的基因表達和感染機制，病毒與宿主的相互作用，以及干擾素誘導的抗病毒機制和以負鏈RNA病毒作為載體用於疫苗形成。

許多能導致人類傳染病的病毒（如麻疹病毒、狂犬病毒、呼吸道合胞病毒和人副流感病毒等）都屬於不分節負鏈RNA病毒。水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus， VSV)是研究不分節負鏈RNA病毒的的模式病毒，該類病毒在細胞質內的複製與轉錄是依賴於自身所攜帶的聚合酶來完成的。VSV的聚合酶輔助因子-磷酸蛋白在其轉錄複製中起著重要的調節作用。磷酸蛋白自身是一個被高度磷酸化的蛋白，磷酸化也是病毒複製循環所不可缺少的。但長期以來，磷酸蛋白磷酸化的具體作用機制一直未能被解析。

在這篇文章中，研究人員利用一種VSV微型基因組系統，證明了P3A的突變（N端磷酸化位點突變），會導致無法進行轉錄與複製，這幾個位點分別是S60/A, T62/A, and S64/A。

研究人員還進行了蛋白相互作用的分析，發現P3A自身相互作用，以及與N端和大蛋白之間的作用與P3A蛋白本身同樣重要，而且由Sf21細胞中分離得到的P3A蛋白，也支持體外轉錄重建實驗。這些實驗數據均說明P3A蛋白的三個磷酸化位點突變之後，會剝奪了功能性N-RNA模板的形成，從而影響病毒的轉錄複製。

這項研究對於揭示磷酸化在磷酸蛋白中所起的作用有重要意義，也為對該類病毒的抗病毒研究提供了新的理論和實驗依據。

除此之外，近期華南農業大學的研究人員也取得了病毒研究的新成果：研究人員完成了一種高致病性雞傳染性支氣管炎病毒株的基因組測序，指出了這種病毒株的分子特徵，也表明了其基因組在不斷進化中，這些結果將有助於國內IBV病毒發展的有效控制，深入了解冠狀病毒的進化特徵。

N-terminal Phosphorylation of Phosphoprotein of Vesicular Stomatitis Virus (VSV) Is Required for Preventing Nucleoprotein from Binding to Cellular RNAs and for Functional Template Formation

The phosphoprotein (P) of vesicular stomatitis virus (VSV) plays essential roles in viral RNA synthesis. It associates with nascent nucleoprotein (N) to form N0-P (free of RNAs), thereby preventing the N from binding to cellular RNAs and maintaining the N in viral genome RNA encapsidation-competent form for transcription and replication. Phosphorylation of P contributing to the transcription and replication has been intensively studied, but concrete mechanism of action still remains unclear. In this study, using a VSV minigenome system, we demonstrated that a mutant of the P (P3A) lack of N-terminal phosphorylation, in which N-terminal phosphate acceptor sites are substituted with alanines (S60/A, T62/A, and S64/A) does not support transcription and replication. However, results from protein interaction assays showed that P3A self-associates and interacts with N and large protein (L) as efficiently as the P. Furthermore, purified recombinant P3A from Sf21 cells supported transcription in an in vitro transcription reconstitution assay. We also proved that P3A is not intranuclearly distributed in vivo. CsCl gradient centrifugation showed that P3A is incapable of preventing N from binding of cellular RNAs, and therefore prevents functional template formation. Taken together, our results demonstrate that N-terminal phosphorylation is indispensible for the P to prevent N from binding of nonviral RNAs and to maintain the N specific encapsidation of viral genome RNA for functional template formation.

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