獻給初學者：手把手教你做細胞計數實驗

繼上次我們推出初學者實驗教程系列之後，很多站友發來私信，希望我們分享更多實驗有關的內容。請大家繼續關注我們的獻給初學者欄目，會有更多大家常用的實驗教程和大家見面。

今天我們就來聊一聊細胞計數實驗。

實驗用品

0.4% 台盼藍溶液、無水乙醇或 95% 乙醇溶液、脫脂棉、普通顯微鏡、試管、吸管、毛細吸管、細胞計數板、綢布。

實驗原理

在細胞培養工作中，常需要了解細胞生活狀態和鑒別細胞死活，確定細胞接種濃度和數量以及了解細胞存活率和增殖度，如用酶消化製備的細胞懸液中細胞活力的鑒別，凍存細胞復甦後的活力檢測等。

細胞懸液製備後，常用活體染料台盼藍對細胞進行染色，進行細胞計數。台盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色。而死亡細胞的細胞膜通透性增高，可使染料進入細胞內而使細胞著色（藍色）。

細胞計數一般用血細胞計數板，按白細胞計數方法進行計數，便於確定細胞的生活狀況。

實驗內容與方法

（一）製備動物細胞懸液

將動物細胞用生物鹽水製備成適當濃度的細胞懸液備用。

（二）細胞計數

計數板處理

用無水乙醇或 95% 乙醇溶液擦拭計數板後，用綢布擦凈，另擦凈蓋玻片一張，把蓋片覆在計數板上面。

染色

用滴管吸取 0.4% 台盼藍染液，按 1∶1 比例加入細胞懸液中。從計數板邊緣緩緩滴入，使之充滿計數板和蓋片之間的空隙中。注意不要使液體流到旁邊的凹槽中或帶有氣泡，否則要重做。稍候片刻，將計數板放在低倍鏡下（10×10 倍）觀察計數。

計數方法

按圖計算計數板的四角大方格（每個大方格又分 16 個小方格）內的細胞數。計數時，只計數完整的細胞，若聚成一團的細胞則按一個細胞進行計數。在一個大方格中，如果有細胞位於線上，一般計下線細胞不計上線細胞，計左線細胞不計右線細胞。二次重複計數誤差不應超過 ±5%（圖 7-1）。鏡下觀察，凡折光性強而不著色者為活細胞，染上藍色者為死細胞。

計數的換算

計完數後，需換算出每 ml 懸液中的細胞數。由於計數板中每一方格的面積為 0.01 cm2，高為 0.01 cm，這樣它的體積為 0.0001 cm3，即 0.1 mm3。由於 1 ml=1 000 mm3，所以每一大方格內細胞數×10 000=細胞數/ml，故可按下式計算：

細胞懸液細胞數/mL =4 個大格細胞總數/4×10 000。

如計數前已稀釋，可再乘稀釋倍數。

計數細胞後，計算細胞懸液濃度並求出存活與死亡細胞數的比例。

注意事項

向計數板中滴細胞懸液時要乾淨利落，加量要適當，過多易使蓋片漂移，或淹過蓋片則失敗，需重做，過少易出現氣泡。不理想時，應重做。

鏡下計數時，若方格中細胞分布明顯不均，說明細胞懸液混合不均勻，需重新將細胞懸液進行混合，再重新計數。

怎樣？學會了嗎？

文章來源：丁香園站友@我就是大仙兒

圖片來源：網路

TAG:生物學霸 |

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