重磅，口蹄疫病毒減毒疫苗研發新思路，通過改變RNA病毒聚合酶的保真性獲得，附文獻全文

導 讀

近日，美國的科學家通過定點突變技術改造獲得口蹄疫病毒減毒株，這對於開發安全及遺傳更穩定的疫苗候選株奠定良好基礎。該項研究發表於國際知名期刊Journal of Applied Virology上。

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的，在偶蹄動物中散播性極強的病毒性疾病。口蹄疫病毒是一中變異性很高的病毒，有7個血清型和多個亞型。在宿主細胞細胞質中，口蹄疫病毒RNA依賴RNA聚合酶（RdRp或3Dpol）執行病毒基因組的複製。RdRp是一種低保真性和缺乏校正活性為特徵的一種酶，這一特徵讓FMDV容易發生變異及適應多樣的環境。

近日，美國的科學家使用FMDV的3Dpol結構結合相似的可納病毒聚合酶先前的結果，設計能夠改變病毒複製保真性的點突變。該研究通過使用生物化學和遺傳學的方法，發現用苯丙氨酸（F）替代位於237色氨酸（W），能夠使RdRp獲得高的保真性；使用異亮氨酸（I）和亮氨酸（L）替代則導致低保真性的表型。該研究還通過一系列試驗證實，通過提高或降低RdRp的保真性能夠減弱病毒在動物體內的增殖，這一主要特徵可用於開發安全及遺傳更穩定的疫苗候選株。具體研究工作如下：

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FMDV 3Dpol突變位點的選取：科學家通過使用從柯薩奇病毒和脊髓灰質炎病毒3Dpol保真性突變體研究中獲取的FMDV 3Dpol的結構和信息，選取位於motif A結構的色氨酸237殘基進行突變，進而改變FMDV聚合酶的保真性。

2

FMDV 3Dpol突變株的構建和體外表徵：為了研究3Dpol237殘基突變體對FMDV在細胞中增殖的影響，研究人員通過構建W237FHF，W237ILF和W237LLF突變毒株和野毒株（WT）進行體外對比試驗。試驗結果發現，在BHK-21細胞中，三種突變毒株的增殖情況與野毒株相比沒有明顯差異。在豬腎原代細胞中，高保真的W237F突變株呈現增殖減緩的情況。

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評估FMDV 3Dpol突變株的適應性：研究人員通過將FMDV突變毒株及WT毒株分別與A24-沉默WT參考毒株共感染細胞BHK-21，來確定突變毒株的相對適應性。結果表明，無論是高保真突變毒株還是低保真突變毒株，其適應性都沒有顯著改變。

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FMDV突變毒株毒力的測定：研究人員使用FMDV突變毒株對小鼠進行攻毒試驗，發現FMDV高保真突變株和低保真突變株的毒力相對於WT毒株都顯著下降。

本期編輯：木木

可獲取文獻原文。

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