如何進行低風險的無菌檢測

無菌藥品的生產是要求最嚴格、風險最大的製藥生產——新版GMP對無菌生產的要求變化最大，標準起點高，從而對藥品生產控制和產量質量有更好的保證。中國製藥企業正面臨著新一輪無菌控制水平提升的挑戰，無菌檢測顯得尤為重要。

根據國際法規(USP, EP 2.6.1, JP, WHO QAS/11.413, cGMP, CHP2015等)的規定，無菌檢測不僅適用於注射藥物，也適用於檢測藥典中規定的無菌的醫藥產品，包括原輔料、眼藥水、無菌器械等。常見的無菌產品劑型為：液體或粉末、藥膏或油狀，固體形態，懸浮液和乳液等，這些產品在最終放行前都必須要測試微生物污染狀況。隨著2015版中國藥典的實施以及病原微生物對人類健康的潛在影響，讓人們更加了解到「無菌檢查」的重要性。

無菌檢驗原理是基於「薄膜過濾」的方法，它可以把微生物從各種樣品中富集，同時經過沖洗去除、中和抑制物質，灌入TSB、FTM培養基，經過14天的培養，觀察樣本在不同培養基內濁度：無渾濁意味著通過無菌檢查！

不過，即便供試品符合無菌檢查法的規定,也僅表明了供試品在該檢驗條件下未發現微生物污染，並不代表整批產品全部無菌。因為無菌檢查本身也有一定的局限性，比如微生物的污染不均勻分布，檢驗方法的有效性以及實驗用品的局限性等。

按照最新的微生物檢測理念，為了讓無菌檢查能夠最大限度的反應整批產品的質量情況，避免出現假陰性或者假陽性的情況，您需要關注實驗流程中的每一個細節，包括操作風險，取樣數量風險，A級環境維持和監測風險，SOP方法驗證，培養基的適用性檢查，儀器設備的自身風險，實驗用耗材的風險控制，結果判定的風險等。

細節決定成敗，在完善細節的同時，您是否曾經也有以下問題？

哪些因素可能導致假陽性或者假陰性？

怎樣證明實驗操作區域無菌？A級區浮游菌如何監測風險最低？

選擇無菌濾筒應該關注哪些方面？如何驗收？怎樣保證濾筒使用前後的濾膜完整性？

無菌檢測設備的使用風險？

陽性對照的目的是什麼？應該怎樣做風險最低？

下面就讓我們一一擊破這些困惑！

導致假陽性或者假陰性影響因素：

1

假陽性

實驗結果呈陽性，但污染並不是來源於產品本身，而是來源於檢驗環境污染未檢出、人員操作、實驗用品、濾筒污染、培養基污染等方面。企業需要花費大量的人力、物力和時間去進行調查。

2

假陰性

實驗結果呈陰性，但產品本身存在微生物污染，這種風險可能會導致產品召回、醫療賠償、品牌貶值等嚴重後果。

假陰性的來源主要因素有：

培養基不合格

方法有效性問題，未完全去除抑制

無菌檢測設備的物理殺傷，如設備剪切力，發熱影響

無菌檢測設備的物理殺傷，如設備剪切力，發熱影響

VHP滅菌後，無菌濾筒中有消毒劑殘留

無菌濾筒本身含有少量化學抑制劑

無菌濾筒的換氣濾器破損或者產生大量氣泡

無菌檢測環境監控：

按照最新的法規要求，無菌檢測需要在具有潔凈室等級A級的隔離室中進行或者B+A級潔凈環境中進行，在這樣的環境下，需要對包括懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及物理參數進行監測以保證環境的合格， 其中浮游菌的監測要求為A級

在GMP指南內介紹了過濾法、撞擊法（多孔篩網、狹縫式）等可用於浮游菌監測。而撞擊法是目前最常用的方法，但是方法本身具有一定的局限性。

比如設備的採樣頭因為是孔式結構，不可能做到100%的物理截留，浮游菌的真實值往往需要通過對檢測值進行數據校正，這會每次結果帶來20-30%的假陰性風險。

另外採樣頭需要消毒，消毒的效果和消毒劑殘留很難評估，也可能會帶來假陽性、假陰性的風險

因為採樣時使用配置好的平板培養基，在A級區使用時需要多層無菌包裝，長時間採樣培養基會丟失水分，如需連續採樣，需要不停地在A級區更換培養基，這個操作本身也會對環境產生不利影響。

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