如何分析免疫組化圖片？

一張完美的免疫組化的片子，該如何分析？最傳統的辦法，簡單定義陽性組，陰性組，但假如只是這樣，顯然不是我今天所介紹的重點，向大家推薦一個軟體：Image pro-Plus（IPP）。

圖像分析前要準備的東西

1. 能拍照的顯微鏡：這個當然需要實驗室的支持，一般拍照的軟體也會配套有，無需自己準備。

2. IPP 的安裝軟體，下面我將介紹安裝，文末我也會提供破解版的軟體鏈接安裝好後進入如下界面。

選擇 Complete 點 OK。

進入軟體後的界面。

File – open 打開一張圖片（我這裡打開了一張軟體自帶的圖片）軟體分為上面菜單欄，和第二行工具欄。

我們這裡以分析免疫組化圖片為例講解（假設粉紅色未陽性表達區域）。

第一步：處理圖像

我們分析的是免疫組化的圖片，所以先要把圖像 intensity 格式。在默認的 intensity 格式中，是圖片灰度，越黑數值越小，越白數值越大。而實際上我們測量的染色強度是光密度，染色越深，光密度值越大。如果不進行光密度單位的轉換，測量的數值將完全相反的。

方法：measure - calibration - intensity，然後在窗口中點 new 按紐，再點一下下面的 std optical density 選項，這時可以看到窗口中的直線變成了反向的曲線。

然後點 system - close（IPP 功能多，建議每次都檢查，如果中途不在進行別的功能，打開軟體後只要操作一次就行，不用每張圖片都操作）

第二步：顏色選取

明確一個概念 AOI（area of interest），即感興趣的區域，也是我們觀察的重點，也就是我們說的免疫組化陽性表達區域。這裡我只介紹入門級的 2 中選擇方法：吸管工具和 HIS 顏色選擇系統。

先介紹吸管工具：

點擊 measure---count/size，跳出如下界面。

點擊 Select Colors，顯示如下。

點擊吸管工具，在圖片上選取 AOI（可以反覆點擊，直到你覺得所有陽性表達都被選中，當然吸管工具右側，有撤銷，橡皮擦等修改工具）。

經過多次點擊，假設現在所有陽性表達都已經被選中，那麼 AOI 選取結束。

下面介紹 HIS 系統選取顏色：

在 HSI 顏色格式中，H 為色調，就是我們眼睛所看到的紅橙黃綠青藍紫等。S 為色飽和度，I 為強度。在選擇 AOI 時，首先保持 S、I 為最大範圍，從 H 中選擇粉色部分。使用這個顏色格式的好處是，選擇的顏色能包括這種顏色的不同深淺及亮度。

顏色選擇好了後，就可以分析了。

強烈推薦一個功能：點擊左下角 File – save file 將此顏色信息保存，下一張圖片可以調用此文件，從而減少操作誤差，也簡化了步驟。

第三步：分析

選擇分析參數：免疫組化常見的幾個參數（意義不多解釋，百度一下）

area 面積

density（mean）平均光密度

diameter 直徑

IOD（integrated optical density）累積光密度

顏色選好後回到先前界面，點擊 Measure-select Measurements 進入選擇測量參數，最常用的四個參數已如上述。

這裡再介紹一點，可設置範圍（上圖中間靠下）：每一個陽性表達區域都是有大小的，如圖可以將小於 10 的陽性表達區域捨棄不計算，這個可以根據自己實際情況調整，但一般取默認值。點擊 OK，回到原先界面點擊 Count，得出結果得出結果（View - Statistics）：

第四步：整理數據

File - Export Data 整理

相信，這樣簡單介紹後能用 IPP 處理一些簡單的免疫組化的圖片數據。

IPP 的功能 其實非常豐富，本人也就使用了其中的 4～5 種功能，我的安裝包里介紹了其他幾個用途，還配有了軟體說明書的中文版，回復 軟體004 即可獲得哦。

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作者：倒賣原子彈

圖片來源：倒賣原子彈

題圖來源：shutterstock.com 正版圖庫

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