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實驗室科研抗體選購指南

前言

抗體毀了你的western blot(免疫印跡試驗)實驗?親,你並不是孤單的一人。在這悲催道路上躺著哭泣的還有很多小夥伴。有時,你會發現新一批次的抗體無法再現之前的結果。有時,你甚至發現抗體根本不能與目標蛋白結合。錢花了不說,時間也一去不復返。下面西域商城實驗室小編和大家一起來找找其中的原因。

1、抗體質量問題

對於科研人員來說,他們最需要的就是得到理想性,重複性好的結果。採購的抗體不工作或者使用相同的抗體卻出現前後矛盾的結果,更是令人頭疼的問題。這就牽扯到抗體產品的可靠性問題。首先,在完成實驗之前不能確認抗體真的有效,其次,很難判斷利用抗體得到結果是否穩定,是否能再次科研實驗重現。

Human Protein Atlas計劃是由瑞典發起的科研項目,該項目使用大量的抗體保證結果的準確性,研究人員採用了29家供應商提供的9000多種抗體進行WB和IHC實驗,結果有49%的抗體完全無效,29%的抗體具有不確定性 ,只有7%的抗體被認為是完全有效且擁有前後實驗的一致性。

抗體生產過程複雜,生產疏忽等問題會導致試劑無法正常使用,其次由於抗體利潤率較高,引得許多公司進入到這個行業,抗體供應商稂莠不齊,魚龍混雜。所以抗體質量本身就令人擔憂。

2、抗體的不穩定性

1.抗體的特異性:抗體的工作原理就是與特異性的蛋白結合,從而實現定性、定量、定位等檢測。因此抗體的特異性就顯得尤其重要,而對特異性影響最大的莫過於抗體的交叉反應。抗體出現交叉反應,導致特異性降低,主要由抗體本身的質量問題所引起的。

2.抗體應用方式的問題:抗體被應用在各種實驗中,包括WB,IHC,IF,ELISA等等,一種抗體不能在所有實驗中都發揮作用,其必然有最適合的一種或者某幾種實驗應用,因為在不同的實驗條件下,目標蛋白的摺疊方式是不一樣的,因此結合位點和與抗體的結合能力都會發生改變。通常抗體供應商都會在產品信息中說明產品適用的應用以及效價。實驗人員應提高自身意識謹慎合理的應用選擇抗體。

3.參考文獻的問題:多數科研人員都會根據參考文獻來選擇抗體,這相對來說是一種比較保險的方法,但也存在很大的風險,大多數參考文獻不能提供足夠的實驗試劑相關信息,包括生產商、批次,產品編號等等信息。這無疑給論文的讀者們帶來了很大困惑。利用參考文獻來選擇抗體,還是有一定障礙的。抗體質量可靠性問題的第二個方面,體現在科研人員們難以使用相同的抗體產品再現之前的實驗結果。

3、信息的不對稱性

對於科研人員來說,找到一款可靠的抗體產品,是很困難的事。況且,面對兩百多萬種眼花繚亂的產品,又該從何處著手?市場上其實有非常好的抗體,但是我們不知道它們在哪裡。這種情況的根本原因在於:科研人員得不到足夠的參考信息來幫助他們挑選可靠的抗體。

絕大多數抗體供應商無法提供完整的產品驗證數據,科研人員們只能從產品的引用文獻中挖掘零星的信息。

從消費者的角度來說,不少科研人員對抗體穩定性的問題並不夠重視,也沒有意識到抗體驗證信息的重要性。他們可能會認為,查看一下說明書,再參考一下相關文獻就足夠了,但是當實驗出現問題,後悔已經來不及了。

我們應該如何選擇抗體呢?

01

你要購買產品最好是經過western blotting的驗證,有數據做支持。如果只有幾篇文獻,那要小心,因為它通常只顯示了目的條帶,而不清楚是否有非特異的條帶。

02

供應商的網站通常列出了抗體的應用以及引用的文獻。如果在選購時參考的數據不多,那麼實驗可能會有風險。

03

許多公司現在提供小包裝的抗體,讓你大膽嘗試,再決定是否購買大包裝。這可是個好機會,既能驗證抗體是否適合你的實驗,又不用擔心浪費太多錢。

04

無論你是採購還是使用抗體,你都必須記住抗體技術存在缺陷,它們可能會有變化。在選擇抗體時需要嚴謹。


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