想不出新項目？這兩個如何？

臨床上，在血液科強大的醫院，標本幾乎不用愁，免疫分型和MRD開展地如火如荼，而在大多數醫院，還只能靠淋巴細胞亞群維生，但是淋巴細胞亞群對於絕大多數醫生來說，都是很難解讀的。

於是，思考新項目，成了不少地方的出路所在。

在當前二胎放開的情況下，不孕不育也隨之增長，除了女性的因素，男性精子的質量問題應該相對來說更明顯，所以，檢測精子活性和精子染色質結構分析，就會特別有需求。

這裡介紹的圖是牛精子的，與人精子的原理應該是相通的：）

精子活性檢測1、羅丹明123和PI雙法

R123 / PI同時定量檢測線粒體膜電位和細胞膜完整性。 用R123染色後，精子中間件的熒光強度與線粒體膜電位和運動性有關，R123的熒光強度降低意味著細胞運動能力降低。PI可標記細胞膜受損細胞的核DNA，發出紅色熒光，提示死亡或即將死亡的細胞。

見下圖，用羅丹明123和碘化丙啶（RI23 / P1）染色的5000個公牛精子的綠色和紅色熒光散點圖。 分別是生育強（A）和生育能力差（B）供體的精子樣本。

2、SYBR14/Pl染色

用SYBR14和PI共染色，很容易區分出具有完整膜的細胞與膜損傷的細胞。 SYBR14是可以透過膜的DNA染料，發出綠色熒光，細胞膜完整時，熒光最強。PI發紅色熒光，死細胞或即將死亡的細胞會染上PI。

下圖中，細胞群1代表PI+SYBR14－的死細胞，細胞群3是SYBR14＋PI－的活細胞，細胞群2則代表正在從活細胞向死細胞過渡。A圖是生育能力好的公牛精子，活細胞數量多；B圖是生育能力差的公牛精子，死細胞多。

精子染色質結構分析（SCSA）

異常染色質結構被定義為對酸誘導變性的敏感性增加（pH 1.2，30秒）。當吖啶橙（AO）標記精子時，在488nm激光下，如果AO插入雙鏈DNA，會發出綠色熒光，如果結合單鏈DNA，則發出紅色熒光。根據（紅色熒光細胞數/（紅色熒光細胞數＋綠色熒光細胞數））可評估變性程度。

如下圖，公牛精子標記吖啶橙後，A圖和C圖是生育能力好的牛精子，紅色熒光部分特別少，而B圖和D圖則是生育能力差的，可見在酸性條件下其變性的單鏈DNA比例較高。

你們覺得這兩個項目如何？

參考源：

http://www.cyto.purdue.edu/flowcyt/research/veteflow/evenson.htm

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